论文部分内容阅读
目的：观察不同浓度的表皮生长因子(Epidermal growthfactor,EGF)对毛囊外毛根鞘（out root sheath，ORS）无色素性黑素细胞（amelanotic melanocytes, AMMCs）增殖能力及迁徙能力的影响。方法：与头皮提供者沟通获得同意后。取头皮并去除脂肪组织及真皮上1mm。采用1%分散酶Ⅱ消化获得毛囊。再采用0.5%胰蛋白酶消化获得外毛根鞘细胞。在含有经Chelex100钠形式螯合后的胎牛血清的专用MCDB153培养基中原代培养。采用差胰酶法传代纯化AMMC细胞。将纯化并传至第三代的细胞，用免疫组织化学染色法鉴定其NKI/beteb与HMB-45的表达。将经过纯化和鉴定后的AMMC，根据EGF的作用浓随机分为5组：0ng/ml（即空白对照组）、1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml浓度EGF干预组。（1）按照分组条件采用不同浓度EGF干预AMMC48小时后。采用CCK8检测法检测各组细胞的增殖能力。（2）将上述经鉴定后的第三代的AMMC，用无血清MCDB153饥饿24h后，采用Transwell体外小室迁移实验检测不同浓度EGF干预AMMC48小时后各组细胞的迁移能力。所测得的结果用x±s统计，应用11.5版本的SPSS统计软件，行单因素方差分析。确定检验水准为P<0.05。结果：人毛囊外毛根鞘的无色素性黑素细胞在含有经Chelex100钠形式螯合后的胎牛血清以及各种添加因子的专用MCDB153培养基中可以有效的扩增。通过采用差胰酶法传代AMMC细胞可以有效的纯化AMMC。AMMC在体外能够连续、稳定的传代。传至第三代的细胞，用免疫组织化学染色显示其NKI/beteb染色阳性。HMB-45的染色为阴性。各组CCK8检测的OD值：空白对照组0.1968±0.1763，1ng/ml EGF干预组0.2986±0.1773，10ng/ml EGF干预组0.6302±0.2292，20ng/ml EGF干预组0.7414±0.2177，50ng/ml EGF干预组0.8198±0.2604。空白对照组的OD值低于10ng/ml EGF干预组、20ng/ml EGF干预组、50ng/ml EGF干预组（P均<0.05）。1ng/ml EGF干预组的OD值低于10ng/ml EGF干预组、20ng/ml EGF干预组、50ng/ml EGF干预组（P均<0.05）。空白对照组与1ng/ml EGF干预组的OD值无明显差异（P>0.05）。10ng/ml EGF干预组、20ng/ml EGF干预组、50ng/ml EGF干预组OD值无明显差异（P>0.05）。各组Transwell体外小室迁移实验检测的迁移细胞数（个）：空白对照组5.88±2.03，1ng/ml EGF干预组6.75±2.71，10ng/ml EGF干预组22.50±5.71，20ng/ml EGF干预组54.75±6.54，50ng/ml EGF干预组55.75±6.30。空白对照组的迁移细胞数少于10ng/ml EGF干预组、20ng/ml EGF干预组、50ng/mlEGF干预组（P均<0.05）。1ng/ml EGF干预组的迁移细胞数少于10ng/ml EGF干预组、20ng/ml EGF干预组、50ng/ml EGF干预组（P均<0.05）。10ng/ml EGF干预组的迁移细胞数少于20ng/ml EGF干预组、50ng/ml EGF干预组（P均<0.05）。而20ng/ml EGF干预组与50ng/ml EGF干预组的迁移细胞数无明显差异（P>0.05）。结论：在体外一定浓度的EGF可以促进AMMC的增殖和迁移。但是随着EGF浓度的升高，其促增殖、迁移作用并没有进一步增加。