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2型糖尿病起病缓慢、隐匿,是由多种因素联合作用引起的.遗传因素和环境因素通过复杂的相互作用机制最终导致2型糖尿病的发生,遗传因素在其发病过程中起着重要的作用.不同民族和地域在遗传和表型上均有异质性,寻找2型糖尿病的易感基因一直是国内外研究的重要课题.外源性化合物代谢酶基因多态性是糖尿病遗传易感性研究的重要方面.N-乙酰基转移酶-2是体内重要的Ⅱ相代谢酶,它不但在某些药物的代谢过程中起着重要的作用,而且其活性存在明显的遗传多态性,可导致酶活性下降和乙酰化代谢能力的不同,影响着人类对某些疾病的易感性.目前,关于NAT2 基因多态性是否对2型糖尿病患者产生影响,国外关于这方面的探讨仍有较大的争论,而国内关于这方面的研究尚未见报道.
目的:(1)观察NAT2基因多态性在温州地区汉族人群的分布频率及特点,为本地区NAT2多态性分布提供可靠数据,并为进一步探讨NAT2基因多态性与药物敏感性的个体化用药方案以及与发生相关疾病的风险提供资料.(2)探讨NAT2基因多态性与2型糖尿病易感性的关系,为糖尿病的有效防治提供科学依据.
方法:
1.收集温州地区汉族174例2型糖尿病患者,详细记录每例患者的资料,包括性别、姓名、年龄、身高、体重、家族史、并发症及其他临床症状.同时选无高血压、高血脂、无心脑血管疾病、无糖尿病及家族史,口服葡萄糖耐量试验正常的健康体检者174例作为对照研究.
2.采用chelex-100法对静脉血标本进行DNA提取,采用PCR技术对目的基因进行增,采用CEQ8000测序仪对NAT2基因进行序列测定.
3.测序结果用DNA STAR软件包中的Editseq观察标本的碱基对序列,并用Chroms软件观察具体的峰图形状以确定是否确有突变发生.用软件Sequence Scanner进行标本的大批量处理.
4.采用SPSS10.0软件Chi-Square(X<2>)和Logistic回归方法分析数据.应用病例对照研究探讨NAT2基因多态性与2型糖尿病的关系.
结果:
1.温州地区汉族健康人群中NAT2等位基因频率分别为:Wt(59.77﹪),M2(21.83﹪),M3(14.36﹪),MI(4.02﹪).未检测到M4等位基因.
2.温州地区汉族健康人群中NAT2各基因型频率分别为:Wt/Wt(39.08﹪),Wt/M2(22.99﹪),Wt/M3(14.94﹪),M2/M3(9.20﹪),M2/M2(4.60﹪),Wt/M1(3.45﹪),M1/M2(2.30﹪),M3/M3(1.72﹪)M1/M3(1.1 5﹪),M1/M1(0.57﹪).
3.温州地区汉族健康人群中快乙酰化者140例(占80.46﹪),其中纯合的快乙酰化者68例(占39.08﹪),杂合72例(占41.38﹪),并以Wt/M2为丰40例(占22.99﹪).慢乙酰化者34例(占19.54﹪),其中纯合的慢乙酰化者12例(占6.89﹪),杂合22例(占12.64﹪),并以M2/M3为丰16例(占9.20﹪).
4.174例2型糖尿病患者中NAT2等位基因频率分别为:Wt(69.54﹪),M2(16.37﹪),M3(10.63﹪),M1(3.44﹪).未检测到M4等位基因.NAT2突变型等位基因频率在病例组和对照组间差异无显著性(x<2>=7.38,P>0.05).
5.174例2型糖尿病患者中NAT2各基因型频率分别为:Wt/Wt(44.82﹪),Wt/M2(27.58﹪),wt/M3(17.24﹪),M2/M3(2.29﹪),M2/M2(1.14﹪),Wt/M1(4.59﹪),M1/M2(0.57﹪),M3/M3(0.57﹪)M1/M3(0.57﹪),M1/M1(0.57﹪).NAT2基因型(野牛型纯合子Wt/Wt,突变杂合了Wt/Mx,突变纯合了Mx/Mx)在对照组中分布频率分别为39.08﹪,41.37﹪,19.54﹪;在糖尿病组中分布频率分别为44.82﹪,49.42﹪,5.74﹪.两组间比较差异显著. (x<2>=13.92,P<0.005)6.174例2型糖尿病患者中快乙酰化者164例(占94.25﹪),其中纯合的快乙酰化者78例(占44.82﹪),杂合86例(占49.43﹪),并以Wt/M2为丰48例(占27.58﹪).慢乙酰化者10例(占5.75﹪),其中纯合的慢乙酰化者4例(占2.3﹪ ),杂合6例(占3.45﹪).而在174例温州地区健康汉族人群中快乙酰化者140例(占80.46﹪),慢乙酰化者34例(占19.54﹪).研究结果表明, 2型糖尿病患者快乙酰化代谢表型的频率显著高于对照组,而慢乙酰化代谢表型的颇率则显著低于对照组(x<2>=14.98,P<0.005).携带NAT2快乙酰化基因型者患2型糖尿病的风险是携带NAT2慢乙酰化基因型者的3.98倍(95﹪CI 1.9, 8.35 ).
结论:1.温州地区汉族人群NAT2突变型等位基因中,以M2为主,主要以Wt/M2形式存在,M1最少,未发现M4.其基因多态分布与东亚人群的分布一致,而与欧美及非洲等其他人群存在极大的差异.2.NAT2基因型Wt/Wt, Wt/Mx, Mx/Mx)在对照组和在糖尿病组中分布频率比较差异显著,本研究提示快乙酰化代谢表型可能是糖尿病的一个遗传易感因素,而慢乙酰化代谢表型可能对糖尿病的发生具有一定保护作用.