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本实验以性别鉴定为研究内容,旨在建立性别鉴定程序,提高性别鉴定的准确率,使性别鉴定技术达到使用化的应用阶段,实现性别控制。实验以反刍动物中的凉山半细毛羊(20个体)、新疆细毛羊(4个体)、山羊(5个体)、牛(6个体)为研究对象,应用多重PCR技术扩增绵羊基因组中X染色体上的微卫星标记MILVET09、AE25和Y染色体上的MCM158、MAF45及SRY基因,根据基因型进行性别鉴定,试图通过一次DNA扩增同时提供性别鉴定和基因分型的信息。 实验结果表明:所设计SRY基因的引物具有高度特异性,是性别鉴定的主要依据,而Y染色体上的MCM158、MAF45两标记的引物由于特异性不好,因此不适用于性别鉴定,对于X染色体上所选的两个标记MILVET09和AE25的引物只能进一步验证所鉴定的雄性个体。结论:在所有的被检个体中,能同时扩增出Y染色体上的SRY、MCM158、MAF45,X染色体上MILVET09和AE25,且X染色体上的MILVET09、AE25基因型为纯合子的个体为正常的雄性,如果某些被检个体的MILVET09、AE25两标记基因型出现杂合子的现象,则说明这些被检个体为性染色体发育异常的雄性(XXY),不能留作种用,本实验所用的雄性实验动物没有出现这种异常情况:被检个体中只有Y染色体上MCM158、MAF45和X染色体上MILVET09、AE25的扩增产物,而没有SRY基因的扩增产物,则被检个体为雌性,且MILVET09、AE25的基因型对雌性个体的性别判断无影响。MCM158、MAF45两标记基因型不影响个体的性别鉴定结果。 过去扩增的X-Y特异性片段多为缺乏多态性的片段,不能提供其他个体差异的信息。该实验选择SRY基因以及X染色体和Y染色体的多个多态位点进行复合扩增可以说是一种有意义的尝试,利用该项研究建立的方法既可进行性别鉴定,又可用来同一认定,与传统的性别检查有着本质的区别,这在今后的体育竞赛、金融保险等领域具有广阔的应用前景。另外,该方法还可用于动物肉食制品的监测、性别分化和性发育异常、疾病筛选、法医学、考古学以及各类刑事案件串、并案的侦破等领域。