萝卜硫素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响及机制研究

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目的:为了对抗环境中的各种损伤,细胞在进化过程中就获得防御这些毒性作用的复杂机制,其中最重要的细胞防御机制是通过转录因子NF‐E2相关因子2(Nrf2)来调节的。萝卜硫素作为Nrf2的激动剂是从十字花科蔬菜中提取出来的。目前研究已经证实萝卜硫素通过激活Nrf2转录因子产生抗炎抗氧化作用,从而对肺脏,肾脏,心脏以及神经系统等多器官功能有着保护作用,但不同剂量的萝卜硫素(SFN)对肝脏缺血再灌注损伤的影响尚未见报道,本研究在于探讨不同剂量的萝卜硫素对肝脏缺血再灌注损伤的影响及其可能的作用机制。方法:50只健康雄性SD大鼠,体重200‐220g,建立大鼠肝脏缺血再灌注损伤的动物模型,通过无损伤动脉夹阻断肝左中叶及肝左外叶的血流造成缺血损伤,取出动脉夹造成再灌注损伤。实验随机分为5组,每组10只。Ⅰ组:假手术组,仅分离肝动脉及其门静脉但不行阻断;Ⅱ组:模型组,建立肝脏缺血再灌注损伤模型;Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组:即SFN1mg/kg、SFN3mg/kg和SFN5mg/kg组,分别于麻醉前1小时经腹腔注射给予萝卜硫素1mg/kg、3mg/kg或5mg/kg,其余步骤同模型组。观察指标包括:血清中AST、ALT水平,肝脏组织匀浆中SOD、MDA、MPO水平,肝脏组织超微结构改变,免疫组化法检测肝脏组织HO‐1的表达水平。统计学处理:采用SPSS13.0软件进行统计学处理,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法,P<0.05为差异有统计学意义。结果:血清ALT、AST比较:与Ⅰ组比较,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组血清ALT、AST值明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅱ组比较,Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组血清ALT、AST值降低,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅲ组比较,Ⅳ组和Ⅴ组血清ALT、AST值降低,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅳ组比较,Ⅴ组血清ALT、AST值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。肝脏组织匀浆中SOD、MDA、MPO水平比较:与Ⅰ组比较,Ⅱ组肝组织匀浆中MDA、MPO水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而肝组织匀浆中SOD水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅱ组比较,Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组肝组织匀浆中MDA、MPO水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),而肝组织匀浆中SOD水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅲ组比较,Ⅳ组和Ⅴ组肝组织匀浆中MDA、MPO水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),而肝组织匀浆中SOD水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅳ组比较,Ⅴ组肝组织匀浆中MDA、MPO水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),而肝组织匀浆中SOD水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。电镜下观察肝脏超微结构结果, Ⅰ组肝组织的细胞结构基本正常;Ⅱ组肝组织的线粒体肿胀明显,线粒体膜破坏,有足肿和空泡变性,线粒体嵴破坏,粗面内质网较少,溶酶体和核糖体较少,细胞核结构明显破坏;Ⅲ组肝组织的线粒体中度肿胀,线粒体嵴少数断裂,有少量空泡变性,细胞核结构尚完整;IV组超微结构改变与Ⅲ组相似;V组肝组织的线粒体轻度肿胀,线粒体嵴少数断裂,粗面内质网多,细胞核结构完整。与Ⅰ组比较,Ⅱ组肝组织HO‐1的表达无明显差异(P>0.05);与Ⅱ组比较,Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组肝组织HO‐1的表达明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅲ组比较,Ⅳ组和Ⅴ组肝组织HO‐1的表达明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅳ组比较,Ⅴ组肝组织HO‐1的表达增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:萝卜硫素处理可以减轻肝脏缺血再灌注损伤,且作用表现出剂量依赖关系,其机制可能与激活转录因子Nrf2,上调其下游基因HO‐1蛋白表达,产生强大的抗炎抗氧化作用,从而减轻肝脏组织的氧化应激和炎性反应有关。
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