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五倍子为瘿绵蚜科的蚜虫在其寄主植物盐肤木等树上形成的囊状虫瘿,富含没食子酸,是生产制备没食子酸的主要资源之一。当前工业化制备五倍子没食子酸主要是采用原料经酸水解、碱水解、生物发酵以及后续的溶剂萃取或离子交换柱色谱分离等方法,但存在工效不高、得率低、环境污染重等技术瓶颈,同时制备出的没食子酸通常是作为化工原料,应用潜能未能充分发挥。本研究通过系统研究五倍子单宁酶酶促降解、高产单宁酶微生物筛选、大孔吸附树脂柱色谱分离纯化以及没食子酸抑制α-淀粉酶作用,建立一套高效制备五倍子没食酸的方法,初步探明了没食子酸抑制α-淀粉酶作用机制与效能,为五倍子没食子酸的高效制备及降血糖功能产品开发提供了科学依据。主要研究结果如下:1、建立了单宁酶酶制剂酶促降解五倍子的优化工艺技术。在研究酶解温度、酶浓度、酶促反应时间以及酶促反应体系pH值对单宁酶降解五倍子制备没食子酸得率影响的基础上,通过响应曲面法优化了单宁酶降解五倍子制备没食子酸的工艺技术。结果表明,没食子酸得率对反应温度(A)、酶浓度(B)、反应时间(C)、反应pH(D)编码值的二次多项回归方程为:Y=-209.037+4.10378A+35.1799B+9.75150C+14.9282D-0.048273A2-2.33787B2-0.652825C2-1.05987D2-0.00275AB+0.02195AC-0.050025AD-0.575675BC-0.221238B+0.137313DC,最优工艺技术参数为酶浓度16.26U/g,酶促反应时间5.88h,酶促反应体系pH5.78,酶解温度40.70℃。在该参数条件下,没食子酸的得率为59.32%。2、筛选出了一种高产单宁酶的微生物菌株。采用平板透明圈和固体发酵相结合的方法,从土壤中筛选出了一株产酶活力较高的9号菌株,初始活力为21.537U/mL。经菌落形态特征及ITS序列分析,鉴定9号菌株为哈茨木霉。通过进一步研究发酵温度、时间、培养基中五倍子含量和含水量4个因素对产酶活性的影响,结果表明,在发酵时间为3d、发酵温度为33℃、五倍子含量为20%以及含水量50%条件下,9号菌株产酶活力达到了25.96U/mL。3、优化筛选了分离纯化五倍子没食子酸的最优大孔吸附树脂及其工艺参数。通过静态吸附与解吸实验,从NKA-2、LS303、HZ816、HP-20、XAD-16、HPD700、HPD500、S-8、AB-8、D101、D301十一种树脂中筛选出了分离纯化没食子酸的最优树脂NKA-2,通过NKA-2树脂对没食子酸的动态吸附与解吸实验,优化了该树脂分离纯化没食子酸的工艺技术参数。结果显示,NKA-2树脂对五倍子提取液中没食子酸的静态吸附量与解吸率分别达到94.856mg/g77.26%;当主要考虑没食子酸纯度时,采用上样浓度7mg/mL、上样体积7BV、上样流速2BV/h、洗脱剂乙醇浓度70%、洗脱体积为2.5BV、洗脱流速3BV/h工艺参数,没食子酸纯度、得率分别为90.97%、78.84%;当主要考虑没食子酸得率时,采用上样浓度5mg/mL、上样体积5BV、流速3BV/h、洗脱剂乙醇浓度70%、洗脱体积为2.5BV、洗脱流速2BV/h工艺参数,没食子酸得率、纯度分别为85.04%、87.10%。4、采用体外实验方法,初步探明了没食子酸抑制α-淀粉酶作用机制与效能。结果表明,当没食子酸浓度达到15mg/mL时,对α-淀粉酶活性抑制率达95.39%。运用酶促反应动力学的方法,测定α淀粉酶Km=0.6785mg/mL,最大反应速率(以△A/min表示)Vmax=3.4883/min, a-淀粉酶的米氏方程为:r=2.3669x+3.4883, R2=0.9990。同时没食子酸对α淀粉酶的抑制机理是通过可逆抑制的竞争抑制来实现的。