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全世界很多地区的土壤盐渍化导致粮食减产,迫使世界各国的生物学者探究如何提高作物耐盐性。通过在盐生植物中寻找关键耐盐性基因,并遗传转化到水稻、玉米等粮食作物,是提高作物耐盐性的可行性途径之一。
盐芥在高盐环境(300mmol·L-1 NaCl)下能够完成生命周期,是一种真正的耐盐植物。很多研究表明植物的耐盐性通常与其有效的抗氧化性正相关。谷胱甘肽过氧化物酶是植物抗氧化酶系的主要成员之一。盐芥具有作为耐盐模式植物的生长特性以及遗传特点。因此,以盐芥为研究材料,克隆盐芥谷胱甘肽过氧化物酶基因并探究这些基因在不同盐浓度下的表达模式对揭示植物的耐盐机理具有重要的意义。
本项研究根据登录在NCBI上的盐芥EST文库数据信息,采用电子克隆策略与实验方法得到了3个谷胱甘肽过氧化酶基因,分别为:ThGPX1、ThGPX3和ThGPX5,并通过半定量RF-PCR(SQ RT-PCR)的方法研究了不同盐浓度处理下ThGPX1、ThGPX3和ThGPX5的表达模式。结果如下:
1.盐芥ThGPX1长度为718bp,包括完整的CDS区。该序列的编码区共705bp,编码235个氨基酸,理论相对分子量约为25906.66Da,等电点为9.45。SQ RT-PCR分析表明:ThGPX1在正常条件下表达,但一定的盐浓度可以诱导ThGPX1表达量提高,根中ThGPX1在400mmol-L-1 NaCl处理下表达量最高,叶中在100mmol·L-1 NaCl处理下表达量最高。
2.盐芥ThGPX3长度为613bp,包括完整的CDS区。该序列的编码区共588bp,编码196个氨基酸,理论相对分子量约22012.33Da,等电点6.74。生物信息学分析推测ThGPX3蛋白内部含有跨膜区及信号肽序列。SQ RT-PCR分析表明:ThGPX3在正常条件下表达,但一定的盐浓度可以诱导ThGPX3表达量提高,根中ThGPX3在300mmol·L-1 NaCl胁迫下表达量最高,叶中在200mmol·L-1 NaCl胁迫下表达量最高。本研究构建了pPZP212一ThGPX3植物表达载体,为进一步研究ThGPX3的功能奠定了基础。
3.盐芥ThGPX5长度是541bp。该序列的编码区共525bp,编码175个氨基酸,理论相对分子量为19615.53Da,等电点9.38。SQRT-PCR分析表明:在正常条件下ThGPX5在根中表达量较低,一定的盐浓度可以诱导ThGPX5表达,在400mmol·-1 NaCl处理下表达量最高。
本研究所获得的实验结果为研究盐芥中GPX家族在耐盐方面的作用奠定了基础。