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目的:探索miRNA靶向疗法和ZY-1多肽对角膜新生血管(neovascularization,NV)的抑制作用,研究其分子作用机制,并评估其眼用安全性。方法:(1)在碱烧伤诱导的小鼠角膜NV模型中,运用Nanostring技术和生物信息学方法检测筛选与NV相关的microRNA(miRNA)及其靶点基因,用RT-qPCR法检测候选miRNA的表达水平。构建候选miRNA相关质粒,以重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)为载体包装质粒。分别在碱烧伤前角膜基质内注射或碱烧伤后结膜下注射miRNA病毒颗粒、空白颗粒及PBS溶剂,通过活体测量和免疫荧光法测算角膜NV面积及其变量。运用RT-qPCR和Western Blot检测候选miRNA、miRNA靶点基因及其信号通路关键因子的表达水平。以正常小鼠为对象,分别角膜基质内或结膜下注射miRNA病毒颗粒和PBS溶剂,活体观察和组织病理学分析其眼部情况。(2)制备来源于人类胎盘生长因子-1(placenta growth factor-1,PlGF-1)的新型多肽ZY-1。用CCK-8和基质胶实验检测ZY-1多肽对VEGF或PlGF诱导的内皮细胞增殖和管腔形成的作用。分别检测眼表滴用ZY-1多肽对大鼠角膜碱烧伤、缝线及小鼠角膜微囊袋诱导的角膜NV抑制作用。用CCK-8检测高浓度ZY-1对人角膜上皮细胞(human corneal epithelial cell,HCEC)的活性影响;以泪膜破裂时间(tear film break-up time,BUT)、组织病理学及电镜分析连续滴用高浓度ZY-1多肽的眼用安全性。结果:(1)共检测618种miRNA在碱烧伤诱导的小鼠角膜NV中的表达,发现35种miRNA表达上调,3种下调。其中miR-184和miR-204的表达水平比对照组降低10倍以上。筛选14种rAAV血清型,并选用能高效感染小鼠角膜的rAAVrh.10包装表达pri-miR184/204的病毒颗粒。相较于对照组,碱烧伤前角膜基质内注射或碱烧伤后结膜下注射rAAVrh.10 pri-miR184/204的小鼠角膜NV面积显著降低。过表达miR-184导致靶基因Fzd4表达下调,抑制Wnt/β-catenin通路激活;过表达miR-204导致靶基因Angpt1表达下调,抑制Angiopoietin-1/Tie2/PI3K/Akt通路激活。大体观察及组化分析表明rAAVrh.10 pri-miR184/204对正常小鼠角结膜及眼底结构无明显影响。(2)多肽ZY-1显著抑制VEGF/PlGF诱导的内皮细胞增殖和管腔形成。眼表滴用ZY-1多肽显著抑制碱烧伤、缝线和VEGF诱导的角膜NV形成。高浓度ZY-1多肽对HCEC细胞活性、大鼠BUT及角结膜结构均无明显影响。结论:(1)过表达miR-184/204可有效预防或治疗角膜NV,其作用可能分别通过靶向抑制Fzd4/Wnt/β-catenin和Angpt1/Tie2/PI3K/Akt通路实现。(2)眼表滴用ZY-1多肽可有效抑制角膜NV。