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目的YAP基因作为一种致癌基因在多种组织表达,通过和多种蛋白质协同,发挥转录调节因子的作用。本研究的主要目的是检测子宫内膜癌组织中和正常子宫内膜组织中YAP基因m RNA和蛋白的表达情况,分析其与子宫内膜癌临床特征的关系,探讨YAP基因在子宫内膜癌发病中的作用。方法首先选取2014年1月到2015年12月于我院诊断为子宫内膜癌并接受子宫内膜癌分期手术的52例患者为实验组,同时选取20例对照组(正常增生期子宫内膜组织)。采用国际妇产科联盟(FIGO,International Federation of Gynecology and Obstetrics)分期系统确定肿瘤分期,其中I期22例,II期20例,III期10例,其中淋巴转移9例,无淋巴转移43例。按世界卫生组织(WHO,World Health Organization)(2003)分类标准进行组织病理分级,其中高分化(G1)21例,中分化(G2)7例,低分化(G3)24例。其中I型28例,II型24例,所涉及子宫内膜癌患者的年龄为38-55岁,平均45.3岁。所有患者术前均未接受化疗、放疗等特殊治疗。20例正常增生期子宫内膜组织均来自我院门诊宫腔镜手术室,宫腔镜探查术术中及术后病理均证实为正常增生期子宫内膜组织,所涉及患者的年龄为38-54岁,平均43.4岁。采用Real-time PCR和Western Blot方法分别检测52例子宫内膜癌组织标本中和20例正常增生期子宫内膜组织标本中YAP基因m RNA和蛋白的表达情况,进一步分析YAP基因的m RNA和蛋白表达与子宫内膜癌患者临床分期、病理分级及淋巴转移的关系。结果1、YAP基因在子宫内膜癌组织中m RNA和蛋白的相对表达量均较正常增生期子宫内膜组织中m RNA和蛋白的相对表达量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。2、在组织病理分级分析中,结果显示YAP基因在不同的组织学分级(G1、G2、G3)中m RNA和蛋白的相对表达量均明显升高,m RNA的相对表达量在三组之间比较均具有明显的统计学差异(P<0.01),但是蛋白的相对表达量中组见比较仅G1和G2、G1和G级之间具有明显统计学差异(P<0.01)。在临床分期的分析中,结果显示YAP基因在不同的临床分期(Ⅰ期,Ⅱ期,Ⅲ期)中m RNA和蛋白的相对表达量均明显升高,但组间比较均无明显的统计学差异(P>0.01)。在淋巴结转移组和无淋巴转移组中,YAP基因的m RNA和蛋白的相对表达量在淋巴转移组均明显升高,两者的差异具有统计学意义(P<0.01)。结论1、YAP基因m RNA和蛋白在子宫内膜癌组织中的相对表达量均显著升高,表明YAP基因子宫内膜癌发病中发挥着重要作用,其促进子宫内膜癌的发生。2、YAP基因的m RNA和蛋白表达与子宫内膜癌分级及淋巴转移有一定相关,提示YAP基因可能与子宫内膜癌的临床进展有关。目的临床上子宫内膜癌患者会发生肌层的浸润和远处转移,预后较差。有研究证实YAP基因协同作用可以促进肿瘤上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的发生,本研究通过检测YAP基因在子宫内膜癌细胞中的表达特性以此探寻YAP基因在上皮间质转化及肿瘤的侵袭、转移过程中发挥的作用。方法首先利用sh RNA技术(short hairpin RNA,sh RNA)干扰YAP基因,构建真核表达载体质粒YAP-sh RNA,脂质体转染法瞬时转染人子宫内膜癌Ishikawa、HEC-1A细胞系,转染后分别于24h、48h收集已转染的细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的表达情况,并测定转染效率。分别采用Real-time PCR和Western Blot方法检测RNA干扰后的sh RNA/YAP组、正常对照组(N)、阴性对照组(NC)中YAP基因及EMT相关标志物E-cadherin基因、N-cadherin基因、Vimentin基因的m RNA和蛋白的表达情况。再次利用脂质体转染法将携带YAP基因的质粒分别转染到子宫内膜癌Ishikawa、HEC-1A细胞系中,建立YAP过表达的细胞株GV230/YAP。同时采用Real-time PCR和Western Blot方法检测过表达细胞株中GV230/YAP组、正常对照组(N)、阴性对照组(NC)中YAP基因及E-cadherin基因、N-cadherin基因、Vimentin基因的m RNA和蛋白的表达情况。利用CCK8实验、划痕实验实验分别检测GV230/YAP、sh RNA/YAP组、正常对照组(N)、阴性对照组(NC)中子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭、转移情况。结果1.对YAP sh RNA有效序列进行筛选出干扰效率较高的YAP-sh RNAII,将其作为实验干扰组进行后续实验。2.已经成功转染的子宫内膜癌细胞可观察到绿色荧光,24h、48h后转染的子宫内膜癌细胞株转染效率均在75%以上。3.Real-time PCR和Western blot分别检测GV230/YAP转染后YAP基因的表达,结果显示:与正常对照组相比,GV230/YAP组YAP基因m RNA和蛋白相对表达表达分别为6.454±0.820和2.116±0.113。4.Real-time PCR和Western Blot检测结果表明:与正常对照组相比,转染sh RNAⅡ组E-cadherin基因m RNA和蛋白表均显著升高(P<0.01),而N-cadherin基因、Vimentin基因m RNA和蛋白则显著降低(P<0.01)。GV230/YAP组同样进行检测,结果表明:与正常对照组相比,Ecadherin m RNA和蛋白表均明显降低(P<0.01),而N-cadherin基因、Vimentin基因m RNA和蛋白则显著升高(P<0.01)。5.CCK8实验显示:与正常对照组相比,YAP/sh RNA组Ishikawa细胞增殖能力在12h后即发生下降,而GV230/YAP组HEC-1A细胞增殖能力在24h后增强。6.细胞划痕实验显示:与正常对照组相比,YAP/sh RNA组Ishikawa细胞的迁移能力24h和48h的迁移能力分别下降了(7.23±2.39)%和(22.04±5.92)%,而GV230/YAP组HEC-1A细胞的迁移能力24h和48h的迁移能力分别提高了(17.54±3.15)%和(23.67±5.07)%。结论:1.干扰子宫内膜癌细胞中YAP基因的表达可抑制细胞的增殖和侵袭、转移,同时抑制子宫内膜癌细胞上皮间质的转化。2.YAP基因过表达可引起子宫内膜癌细胞的侵袭和转移以及增殖能力增强,同时增强子宫内膜癌细胞的上皮间质转化的能力。3.YAP基因在子宫内膜癌细胞中促进细胞的增殖和侵袭、转移能力,参与EMT的发生和子宫内膜癌的生物学行为的调控。