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目的:探讨骨髓间充质干细胞对致脑炎性MBP68-86-特异性T淋巴细胞的抑制和激活作用。 方法:1、全骨髓贴壁法提取、培养Lewis或SD大鼠股骨、胫骨内的MSCs。2、在Lewis大鼠尾根部注射200μL免疫乳剂,其中包括MBP68-8625μg、PBS100μL、结核菌素2mg、弗氏佐剂100μL。建立EAE动物模型,观察动物发病情况并进行临床评分,对照组大鼠仅免疫CFA。3、EAE大鼠免疫10-11天后,MBP68-86特异性T淋巴细胞被取出进行体外T淋巴细胞增值试验。72小时后,用3H-thymidine进行增殖实验检测。从Lewis大鼠中得到的间质干细胞分别按下列要求预培养:在24孔板中T细胞比值:1:1(1×106骨髓基质细胞/T细胞1×106),1:5(2×105的MSCs/1×106个T细胞),1:10(1×105骨髓基质细胞/T细胞1×106),1:50(2×104个干细胞/T细胞1×106)或1:100(1×104骨髓基质细胞/1×106个T细胞)。4、将增殖试验中所用到的淋巴细胞培养上清用ELISA方法检测IL-2,IFN-γ,TGF-β和IL-6的分泌水平,以确认在淋巴细胞增殖试验中所观察到的现象。5、通过双层培养板对MSCs和MBP68-86特异性T淋巴细胞进行非接触性培养。72小时后,淋巴细胞被取出进行增殖试验检测。6、SD大鼠中分离的MSCs重复之前的淋巴细胞增殖试验。 结果:1、同种同基因的MSCs以MSCs与效应T细胞比例为1:1,1:5,1:10时共培养能够显著抑制MBP68-86特异性T淋巴细胞的增殖能力,与没有加入MSCs的单独MBP68-86特异性T淋巴细胞组相比在统计学上有显著性差异(P<0.01)。在MSCs与效应T细胞的比例低到1:50的时候,MBP68-86特异性T淋巴细胞的增殖作用比单纯效应T细胞高出90%。2、MSCs与效应T细胞在1:1的细胞比例下共培养导致培养上清中的IL-2(P<0.01)和IFN-gamma(P<0.01)的分泌量显著降低。与此同时,随着MSCs与效应性T细胞共培养比例降低,培养上清中IL-2和IFN-gamma的含量水平逐渐增加。3、在MSCs与效应性T细胞低比例共培养(1:50)的条件下,同种同基因MSCs上的CD86和MHC-Ⅱ分子表达水平显著升高。4、同种异基因MSCs对MBP68-86特异性T淋巴细胞发挥了相似的免疫调节作用。 结论:1、骨髓间质干细胞(MSCs)在高密度(MSCs/T细胞数比≥1:10)的情况下,对MBP68-86-特异性T细胞表现为抑制作用;在较低的密度(数比≤1:50)时,表现为刺激的作用;2、低MSC/T细胞数比例的MSC,MHC-Ⅱ和CD86的表达明显升高;3、MSCs在低细胞比例培养的条件下刺激MBP68-86特异性T淋巴细胞的增殖作用需要通过对T细胞进行接触来完成。然而对于高密度下的抑制作用不必依赖细胞之间的相互接触;4、MSCs对于MBP6s-86特异性T淋巴细胞的免疫调节作用不需要MHC相匹配。