论文部分内容阅读
第一部分：造血干细胞移植治疗恶性淋巴瘤复发危险因素的筛选目的：研究Bcl-2、Ki-67、P53、C-myc、Mdm2和cyclin-D1在非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞中的蛋白表达以及与恶性淋巴瘤(ML)自体造血干细胞移植(AHSCT)预后的相关关系。方法：采用免疫组织化学(IHC)法对65例常规治疗的ML患者及33例行AHSCT治疗的ML患者的组织切片进行Bcl-2、Ki-67、P53、C-myc、Mdm2和cyclin-D1蛋白的检测。生存率统计采用Kaplan-Meier生存曲线，Log-rank检验，多因素分析采用Cox风险回归模型。结果：1、在本研究患者的病理组织中，Mdm2，cyclin-D1均未见明显阳性表达。Bcl-2表达与NHL细胞来源有关，B细胞NHL阳性率高于T细胞NHL(P＜0.05)；而与NHL患者性别、年龄、临床分期和B症状无关。而Ki-67，P53，c-myc表达与NHL细胞来源、患者性别、年龄、临床分期和B症状等无关。2、65例常规治疗的ML患者，P53和c-myc的表达与预后无关，Bcl-2表达与B细胞NHL的预后相关，阳性表达组与阴性表达组3年生存率分别为22.22％和55.56％(P＜0.05)。Ki-67阳性表达组3年无病生存率(DFS)为37.50％(12／32)，阴性表达组3年DFS为61.54％(8／13)(P＜0.05)。对B细胞NHL的联合检测Bcl-2和Ki-67，两者均阳性组的1年和3年DFS明显低于两者均阴性组，(P＜0.001)。3、33例AHSCT治疗组，P53和c-myc的表达与预后无关，Bcl-2阳性表达组和阴性表达组移植后3年无病生存率分别为35.71％和88.89％(P＜0.05)；Ki-67阳性表达组和阴性表达组3年无病生存率分别为43.75％和85.71％(P＜0.05)，提示Bcl-2和Ki-67的表达与AHSCT的预后相关。4、Cox多因素分析显示，Ki-67和Bcl-2是影响ML患者AHSCT后无病生存的相关因素(P=0.0437)。结论：Bcl-2、Ki-67蛋白阳性表达的ML患者，AHSCT后易复发，可作为移植后预后判断的指标之一。Ki-67和Bcl-2不仅是与ML患者治疗后复发密切相关的独立预后因素，而且还是影响ML患者AHSCT无病生存的独立相关因素。第二部分：荧光定量PCR检测Bcl-2、Ki-67在恶性淋巴瘤造血干细胞移植后复发风险预测的前瞻性研究目的：探讨Ki-67、Bcl-2的基因表达与ML患者自体造血干细胞移植后复发之间的关系，分析其对AHSCT后复发的预测意义，寻找简便快捷便于临床开展的检测方法，进而为AHSCT适应症的选择及移植后进一步的个体化巩固治疗提供重要的分子标记，大幅度提高AHSCT的ML患者的治愈率和生存期。方法：选择2001年6月-2003年5月天津医科大学附属肿瘤医院ML住院患者62例，均经病理组织学确诊，其中常规治疗组32例(NHL 30例，HD 2例)，AHSCT组30例(NHL 28例，HD 2例)。同时选取正常受试者10例作为对照组。采用免疫组化法检测常规治疗组32例和造血干细胞移植组30例ML患者组织标本中的Ki-67、Bcl-2蛋白表达，同步采用荧光定量PCR分别对骨髓和外周血标本中Ki-67、Bcl-2的基因表达进行检测。采用Wilcoxon秩和检验、Kaplan-Meier法，log-rank检验对检测结果进行统计。结果：常规治疗组中骨髓和外周血标本中Ki-67、Bcl-2表达与ML分期有关，与患者性别、年龄及有无B症状无关。对组织标本进行免疫组化分析在常规治疗组中，Ki-67阳性表达率为46.88％(15／32)，阴性表达率为53.12％(17／32)；Bcl-2阳性表达率为53.13％(17／32)，阴性表达率为46.87％(15／32)。在AHSCT组中，Ki-67阳性表达率为53.33％(16／30)，阴性表达率为46.67％(14／30)；Bcl-2阳性表达率为43.33％(13／30)，阴性表达率为56.67％(17／30)。在AHSCT组中，骨髓及外周血标本中Ki-67和Bcl-2ΔΔCt较低组与较高组比较经log-rank检验，两组生存率比较有统计学差异(P＜0.05)。Ki-67和Bcl-2基因表达量与ML患者3年无病生存率具有明显的负相关。32例行常规治疗的患者3年无病生存率为44％；常规治疗组骨髓及外周血标本中Ki-67和Bcl-2ΔΔCt较低组与较高组比较，经log-rank检验，两组生存率比较有统计学差异(P＜0.05)。与AHSCT组结果相比，Ki-67和Bcl-2基因表达量与ML患者3年无病生存率也具有明显的负相关。患者骨髓和外周血联合监测分子生物学指标Ki-67和Bcl-2，其结果与患者病理组织中该基因的蛋白表达具有明显的相关性和一致性。结论：荧光定量PCR检测Ki-67、Bcl-2基因表达是一种有效的方法。Ki-67、Bcl-2基因表达与ML患者经常规治疗及AHSCT后复发密切相关。取材于骨髓和外周血的基因表达检测可以替代病理组织的上述指标监测，为今后对AHSCT患者的预后判断及移植适应症的选择提供了新的方法，且该方法临床操作简便，具有广阔的临床应用前景。