银杏叶中黄酮的提取与分离纯化研究

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黄酮类化合物因具有很高药用价值作为天然产物应用广泛。银杏叶中存在着大量的黄酮类化合物,充分的利用和开发银杏黄酮资源,有着非常深远的意义。本文以银杏叶为研究对象,选取芦丁为标准物质,采用紫外分光光度法和溴量法测定银杏叶中总黄酮含量,用紫外分光光度法测定黄酮,测定波长λ=352nm,吸光度与浓度的关系为:A=0.0195c-0.0065,线性相关系数R=0.9991;用滴定分析方法溴量法测定银杏黄酮含量,测定条件为6mol/L HCl的用量为3.00mL,0.1mol/L的溴试剂用量为6.00mL,10%的KI用量为3mL,在此条件下得出1分子的黄酮可以和5分子的溴反应。本文研究了工业酒精回流法提取银杏叶总黄酮的工艺,以工业酒精体积分率、提取时间、温度、料液比、微波时间、微波功率为考察因素,进行了单因素条件研究。在此基础上选择了其中影响提取率较大的四个因素进行正交实验,确定最佳提取条件为:提取时间60min,提取温度70℃,微波时间3min,料液比1:20,此时黄酮提取量达量为84.42mg/g。影响提取因素的强弱次序为:温度>料液比>提取时间>微波时间。本文采用静态实验和动态实验方法研究大孔吸附树脂和聚酰胺树脂分离纯化黄酮的最佳工艺条件。以芦丁作为银杏总黄酮标准物,通过静态吸附及解吸实验,包括静态吸附动力学、吸附等温线、解吸剂浓度对解吸率的影响和解吸静态平衡时间,结果表明:树脂对黄酮的吸附基本上在150min左右达到了平衡,动力学数据拟合结果符合Elovich方程,相关系数达到0.94以上,符合Freμndlich等温吸附模型且相关系数均在0.94以上,状态函数ΔH0、△G0均小于0,树脂吸附黄酮是一个自发的放热过程,解吸剂浓度选定为60%的工业酒精,解吸时间为60min;后续的动态实验,包括上样浓度及流速对吸附率的影响、解吸剂体积分数及流速对解吸率的影响、穿透实验和动态解吸曲线的绘制,确定出HPD-100大孔吸附树脂、FL-2大孔吸附树脂、聚酰胺树脂的最佳上样浓度分别为50μg/mL、50μg/mL、30μg/mL,上样速率均为3mL/min,解吸剂体积分数均为50%,解吸剂流速均为3mL/min,最大动态吸附量分别为56.05mg/g、48.69mg/g、22.58mg/g。本文还对银杏叶提取液中黄酮进行了分离纯化研究,用石油醚进行脱脂处理,以HPD-100大孔吸附树脂、FL-2大孔吸附树脂、聚酰胺树脂为吸附剂,以树脂上的最佳动态吸附与解吸条件为操作参数,进行银杏叶提取液中总黄酮的分离纯化,用紫外扫描图谱、红外图谱、高效液相图谱对分离纯化后得到的产物进行纯度和结构的表征。研究发现此方法对银杏叶黄酮有良好的分离纯化作用。分离纯化后总收率达到75.57%。
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