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目的：探讨Th17细胞在蛔虫抗原诱导的人肺腺癌细胞（A549）凋亡中的作用机制。方法：1、蛔虫抗原诱导细胞凋亡（1）蛔虫抗原的制备：将人蛔虫虫体制成匀浆，经10,000rpm离心30min，去除组织糜沉淀及大分子蛋白，取上清过0.4μm滤膜除菌，用核酸/蛋白分析仪检测其蛋白浓度，并排除内毒素污染后，分装后置-30℃冻存备用。（2）肿瘤细胞株的培养：A549细胞常规复苏后，用含10%FBS的RPMI1640培养液调整细胞浓度至1×105/ml，置37℃，5％CO2的细胞培养箱中培养。待细胞至对数生长期时用0.25%的胰蛋白酶消化传代。（3）细胞活性检测：取对数生长期A549细胞，经0.25%的胰蛋白酶消化后制成细胞悬液，加入96孔板，每孔10,000个细胞，置37℃，5％CO2的细胞培养箱中培养4h，然后加入不同浓度蛔虫抗原分别培养18h和24h，加入10μlCCK-8,培养2-3h，酶标仪检测OD450值。根据OD450值确定抗原作用浓度及时间。2、细胞凋亡和周期的检测（1）T细胞制备和鉴定：取健康人全血用淋巴细胞分离液分离，吸取淋巴细胞层后用无血清RPMI1640洗涤2次，用含5%FBS的RPMI1640重悬细胞，过尼龙毛柱。过尼龙毛柱后的细胞加入相对应量的anti-CD3FITC、anti-CD4APC、anti-CD8PE、anti-CD45PerCP避光孵育15min，流式检测T细胞纯度，CD3、CD4以及CD3+CD8+表达为T细胞。（2）细胞凋亡率检测：A549细胞组和A549细胞+T细胞共培养组培养4h后，加入不同浓度的蛔虫抗原（25μg/ml、125μg/ml、500μg/ml）分别作用1h、18h、24h后收集细胞。用4℃预冷磷酸盐缓冲液洗涤2次，加入1.25μl AnnexinV-FITC，常温避光孵育15min后离心，加入PI10μl,上流式细胞仪检测。（3）细胞周期检测：细胞培养4h后，加入125μg/ml的蛔虫抗原与A549细胞作用18h后，收集细胞，预冷磷酸盐缓冲液洗涤2次，70%乙醇4℃固定过夜，加入300μl配制备好的染液避光孵育30min，上流式细胞仪检测。3.细胞因子表达的检测（1）实验分组：实验分为5组，分别为组①：A549细胞+培养基；组②：A549细胞+T细胞；组③：A549细胞+蛔虫抗原；组④：蛔虫抗原+T细胞；组⑤：A549细胞+蛔虫抗原+T细胞。蛔虫抗原分别设定低、中、高三个剂量浓度。（2）Transwell小室共培养：组②A549细胞+T细胞和组⑤A549细胞+蛔虫抗原+T细胞采用Transwell小室共培养体系，将上室加入T细胞下室加入A549细胞T细胞、A549细胞密度比为15:1。使细胞之间自身并不接触，而细胞之间的影响只通过细胞因子之间的传递。（3）ELISA检测细胞因子：收集各实验组细胞上清，使用ELISA试剂盒检测细胞因子IL-6、IL-17、IL-23和TGF-β。（4）荧光定量PCR：分别提取各组细胞的总RNA，用逆转录试剂盒合成cDNAs，用Applied Biosystems7500Real-Time PCR System检测cDNAs特异性引物IL-6、IL-17、IL-23和TGF-β mRNA表达。用SYBR Premix Ex Taq I kit检测目的产物，实时PCR反应体系为：95℃、30S；（95℃、5S；60℃、34S）×40个循环95℃、15S；60℃、1min；95℃、15S。计算相对表达值。4.数据处理统计学分析：采用SPSS19.0统计软件进行分析。独立实验的数据采用Mean±SD表示，小样本数据采用Lg10转换，实验组与对照组的组间差异比较采用one-way ANOVA与t检验分析，P<0.05为差异具有统计学意义。结果：1、细胞毒性检测：取细胞存活率大于50％为诱导实验的浓度。蛔虫抗原浓度为125μg/ml时，细胞抑制率34%，为所有作用浓度最高，且与阴性对照组比较有显著性差异（P<0.01）。故取蛔虫抗原低、中、高浓度分别为25μg/ml、125μg/ml、500μg/ml。2、细胞凋亡率检测：蛔虫抗原125μg/ml浓度处理组在18h时，细胞早期凋亡率（37.801.70）%显著高于对照组（7.250.50）%；而与T淋巴细胞共培养的蛔虫抗原125μg/ml浓度处理组在18h时，细胞早期凋亡率则由（37.801.70）%下降到（7.200.57）%。3、A549细胞周期检测：蛔虫抗原125μg/ml浓度处理组在18h时，细胞周期G1/S占8.18，显著高于阴性对照G1/S的4.57。4、细胞因子表达检测：1) ELISA检测：在同一时间段内，当蛔虫抗原浓度增加时，除TGF-β外，其他细胞因子的表达水平都随着浓度的增加而升高，且都有显著性差异（P<0.05）。在同一浓度下，除TGF-β外，其他细胞因子的表达水平都随着蛔虫抗原作用时间的延长而降低，存在显著性差异（P<0.05）。TGF-β则在各时间段和各浓度区间内无明显趋势。2)荧光定量PCR：各实验组A549细胞的IL-6、IL-17和TGF-β mRNA水平都在18h达到高峰，且都与空白对照组存在差异性（P<0.05）。各实验组T淋巴细胞的IL-6、IL-17、IL-23和TGF-β mRNA水平也在同一作用时间段达到最高，且与对照组存在差异性（P<0.05）。结论：1.蛔虫抗原诱导A549细胞凋亡阻滞在G1期。2.蛔虫抗原能够刺激T细胞IL-17和IL-23表达水平增高使Th17活化。3.蛔虫抗原诱导的A549细胞凋亡与Th17细胞的分化有关。4.随着蛔虫抗原作用时间延长TGF-β表达无明显趋势，而IL-6升高，IL-17和IL-23表达水平降低，导致Th17细胞的分化受阻，细胞凋亡被抑制。