论文部分内容阅读
目的:对扶芳藤及其类似品进行形态学、PCR-ISSR鉴别,为扶芳藤及其类似品的生药鉴别提供依据;建立扶芳藤PCR-ISSR的实验体系及鉴别方法;对爬行卫矛、冬青卫矛、无柄卫矛进行药理活性的初步研究,为寻找爬行卫矛的替代品提供实验数据。
方法:1.对扶芳藤的国内外研究文献进行系统查阅整理、分析归纳形成综述(附后);2.对扶芳藤及其类似品制成石蜡切片,利用生物显微镜进行观察;3.在对PCR-ISSR技术及其应用进行整理成综述(附后);建立了扶芳藤的ISSR实验体系,并对扶芳藤及其类似品进行鉴别研究及亲缘关系的考查,计算出爬行卫矛及其类似品的相似度。4.对爬行卫矛、冬青卫矛、无柄卫矛进行了对小鼠免疫器官重量指数的影响和对小鼠凝血时间影响的初步研究。
结果:1.制作了扶芳藤及其类似品茎、叶的石蜡切片、叶表面观片,观察其显微结构,拍摄并绘出显微结构图,并对图进行了文字描述。为扶芳藤及其类似品提供了显微鉴别的资料。2.石角立了扶芳藤PCR-ISSR实验体系为:10×Taq酶配套缓冲液,1.6mmol/LMgCl2,200μmol/LdNTP,0.2μmol/L引物,1UTaqDNA聚合酶,DNA模板约20ng的25μl反应体系。相应的扩增程序为:94℃预变性,5min,94℃变性45s,53℃复性45s,72℃延伸2min,共45个循环后,72℃延伸7min补齐。通过UPGMA聚类分析可以将扶芳藤及其类似品鉴别之,为扶芳藤的鉴别研究提供了新方法。筛选出引物UBC-851可清晰鉴别出爬行卫矛、无柄卫矛、和冬青卫矛,引物UBC-811可鉴别出产爬行卫矛和常春卫矛,引物UBC-857可鉴别出爬行卫矛、金边扶芳藤及微叶扶芳藤。根据相似度可知,与爬行卫矛相比微叶扶芳藤的相似度最大,冬青卫矛相似度最小。3.药理活性的初步研究表明冬青卫矛的水提物、无柄卫矛的水提物、及无柄卫矛的醇提物在控制好药物剂量的情况下均有凝血作用;爬行卫矛、无柄卫矛有提高机体非特异性免疫力作用。为寻找爬行卫矛的代替品提供了基础实验数据。
结论:文献检索表明目前国内未见对扶芳藤的类似品进行茎、叶的显微鉴别研究;未见扶芳藤及其类似品的PCR-ISSR鉴别研究;未见冬青卫矛、无柄卫矛对小鼠凝血时间及对小鼠免疫器官重量影响的实验研究。
本文对扶芳藤的类似品进行显微鉴别研究。运用ISSR对扶芳藤及其类似品进行ISSR鉴别研究,并建立了实验体系。实验证明运用PCR-ISSR方法对扶芳藤及其类似品进行鉴别,方法可行。对冬青卫矛、无柄卫矛进行小鼠凝血时间及小鼠免疫器官重量影响的实验研究,表明冬青卫矛的水提物、无柄卫矛的水提物、及无柄卫矛的醇提物在控制好药物剂量的情况下均有凝血作用;爬行卫矛、无柄卫矛均有提高机体非特异性免疫力的作用。本论文研究内容经科技查新证实,目前尚未见与上述特点相同的国内文献报道。