论文部分内容阅读
本研究以所在实验室保存的PRSV-HN基因组全序列(GenBank中的登录号为：EF183499)为模板，进行番木瓜环斑病毒PRSV各基因的克隆；构建了真核融合表达载体(诱饵载体以及激活域载体)，并检测其对酵母细胞毒性以及自身激活作用；最后，通过酵母双杂交技术检测PRSV各基因编码蛋白自身的相互作用，建立了番木瓜环斑病毒蛋白互作图谱。
实验结果表明，通过PCR技术获得了正确的PRSV基因各片段，并成功构建了酵母双杂交系统的诱饵载体(pBD-GAL4Cam-P1、pBD-GAL4Cam-HC-pro、pBD-GAL4Cam-P3、pBD-GAL4Cam-6K1、pBD-GAL4Cam-CI、pBD-GAL4Cam-6K2、pBD-GAL4Cam-NIa-vpg、pBD-GAL4Cam-NIa-pro、pBD-GAL4Cam-NIb、pBD-GAL4Cam-CP)以及激活域载体(pAD-GAL4-2.1-P1、pAD-GAL4-2.1-HC-pro、pAD-GAL4-2.1-P3、pAD-GAL4-2.1-6K1、pAD-GAL4-2.1-CI、pAD-GAL4-2.1-6K2、pAD-GAL4-2.1-NIa-vpg、pAD-GAL4-2.1-NIa-pro、pAD-GAL4-2.1-NIb、pAD-GAL4-2.1-CP)，同时检测了对酵母细胞无毒性以及无自激活作用；利用酵母双杂交系统对100个(10个结合域载体×10个激活域载体)蛋白相互作用组的检测，共获得9对有相互作用的蛋白，分别是NIa-vpg与P1、NIa-vpg与P3、NIa-vpg与CP、NIa-vpg与NIa-vpg、NIa-vpg与CI、CP与CP、NIa-pro与CI、NIa-pro与NIa-pro以及P3与NIb：本论文利用PRSV蛋白间的相互作用关系建立了PRSV蛋白互作图谱，并根据相关的文献资料对相互作用蛋白进行了相应的分析，鉴于这些蛋白的已知功能和作用，我们推测，NIa-vpg自身的相互作用可能促进病毒复制和翻译复合物在病毒基因组RNA正确位置的复原，CP自身的相互作用可能促进了病毒复制以及侵染植物的过程，NIa-pro核内含体自身相互作用对基因组扩增具有重要的作用，NIa-vpg与P1以及NIa-vpg与P3发生相互作用与RNA复制相关，NIa-vpg与CP以及NIa-vpg与CI的相互作用都和病毒运动相关，由于NIa-pro具有VPg的功能，那么我们推测NIa-pro与CI相互作用的情况可能类似于NIa-vpg与CI，NIb一般被认为是一种依赖于RNA的RNA聚合酶，而P3与RNA复制相关，我们推测他们的互作在病毒制病机制中的作用类似于NIa-vpg与P3之间的相互作用。