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目的:口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)约占口腔癌的90%以上,尽管目前癌症治疗的方案不断改善,但OSCC患者的5年生存率仍在50%左右。这就迫切要求我们发现新的技术与新的生物学标记物,对OSCC患者进行早期预防与早期干预。本研究将采用新型蛋白组学技术筛选OSCC与正常组织中差异表达蛋白,并探索其对OSCC生物学功能的调控作用。方法:1、以同位素相对标记与绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)结合二维液相色谱法和串联质谱法(2-dimensional liquid chromatography and tandem mass spectrometry,2D LC-MS/MS)来鉴定肿瘤与正常组织之间的差异表达蛋白,并对这些差异蛋白做生物信息学分析。2、根据生物信息学结合RT-PCR方法筛选出理想差异表达蛋白PIP,并通过RT-PCR和Western blot验证PIP在OSCC临床组织样本中的表达。3、构建PIP过表达载体,对OSCC细胞系SCC15、SCC25细胞分别转染PIP过表达载体、PIP干扰RNA(siRNA-PIP)及相应对照,采用细胞克隆、MTT、流式细胞仪、细胞划痕、Transwell等方法检测PIP对SCC15、SCC25细胞增殖活性、克隆形成能力、细胞周期及迁移侵袭能力的影响。4、采用免疫组化的方法检测PIP在45例OSCC临床组织样本中的表达水平。5、根据PPI蛋白网络图预测PIP调控OSCC的信号通路,并采用Western blot进行验证。6、使用AKT/MAPK抑制剂处理SCC15、SCC25细胞,并与siRNA-PIP共培养,观察细胞的增殖、迁移与侵袭情况。结果:1、iTRAQ技术结合2D LC-MS/MS筛选出1251个差异蛋白,893个上调358个下调,在下调的差异蛋白中随机筛选出10个与结合功能相关的蛋白,其中PIP下调的效果最为明显。2、RT-PCR和Western blot结果均显示PIP在OSCC组织样本中表达显著低于正常组织。3、MTT及克隆形成实验结果显示PIP能够显著抑制SCC15、SCC25细胞的增殖及克隆形成能力,而转染siRNA-PIP的SCC15、SCC25细胞的增殖及克隆形成能力明显升高;同时,通过流式细胞仪检测可知,PIP使SCC15、SCC25细胞在G0/G1期发生阻滞。4、细胞划痕与Transwell实验结果显示PIP能够显著抑制SCC15、SCC25细胞的迁移侵袭,而siRNA-PIP能够提高SCC15、SCC25细胞迁移侵袭的能力。5、免疫组化实验结果显示在腺泡与基质中均可检测到PIP,并且正常组织与高分化OSCC组织中的PIP表达水平显著高于中低分化OSCC组织。6、根据PPI网络图发现PIP与AKT/MAPK信号通路有关,同时Western blot结果显示转染siRNA-PIP能够显著升高p-AKT与p-ERK1/2蛋白的表达水平。7、AKT/MAPK抑制剂处理SCC15、SCC25细胞后,两细胞系均表现出增殖、迁移与侵袭的能力下降,而当与siRNA-PIP共培养后,可补偿这种抑制效果。结论:1、在OSCC临床样本中PIP的表达降低,通过AKT/MAPK信号通路可显著抑制OSCC细胞的增殖活性与迁移侵袭能力。2、PIP的低表达与OSCC患者的不良组织分型有关;同时,PIP可能由腺泡分泌进入基质作用于OSCC细胞。