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【目的】纤维蛋白原样蛋白2(Fibrinogen-like protein 2/fibroleukin)又称纤维介素,有膜型和分泌型两种形式,mfgl2(membrane fgl2)主要表达在肿瘤细胞、巨噬细胞、内皮细胞等表面,可催化凝血酶原为凝血酶,从而参与肿瘤生长和转移等病理过程中。本实验室成功合成靶向人fgl2的腺病毒微小RNA(Ad-hfgl2-mi RNA),本研究旨在探讨其对人肿瘤细胞增殖的影响,进一步进行肝癌裸鼠皮下荷瘤的体内干预研究。【方法】1.流式检测人正常肝细胞LO2、肝癌细胞LM3、宫颈癌细胞Hela、鼻咽癌细胞CNE和大细胞肺癌细胞NCIH460表面hfgl2和柯萨奇-腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor CAR)表达;2.采用Western-Blot检测Ad-hfgl2-mi RNA对fgl2蛋白干预作用;3.确定Ad-hfgl2-mi RNA感染人肿瘤细胞的最适感染复数(multiplicity of infection,MOI);4.CCK-8法检测Ad-hfgl2-mi RNA对LM3、Hela、CNE和NCIH460细胞增殖的影响;5.将人肝癌细胞LM3接种于裸小鼠皮下,建立皮下移植瘤模型,将瘤体积达到约100mm3的荷瘤鼠随机分组,分别行瘤内注射高、中、低剂量(3.3*1010IU、1.0*1010IU、3.3*109IU)Ad-hfgl2-mi RNA及非相关对照腺病毒,6天干预1次,共干预3次,干预期间测量瘤体大小,计算肿瘤体积、相对肿瘤体积及相对肿瘤增殖率。【结果】1.流式检测hfgl2在人正常肝细胞LO2几乎不表达,在人肿瘤细胞LM3、Hela、CNE和NCIH460细胞表面均有表达,静息状态下表达fgl2的Hela细胞阳性率为12%,不同浓度TNF-α刺激下其fgl2表达水平不同,在40ng/ml浓度下表达水平最高,可达到25%;静息状态下表达fgl2的LM3、CNE、NCIH460细胞阳性率分别为15%、19.1%、15.9%。2.WB结果表明Ad-hfgl2-mi RNA对目的蛋白fgl2表达有抑制效应。3.Ad-hfgl2-mi RNA感染LM3、Hela、CNE和NCIH460细胞最适MOI值分别是200、50、100、100。4.CCK-8法表明不同浓度Ad-hfgl2-mi RNA对LM3、Hela、CNE和NCIH460细胞均有增殖抑制作用,并表现出剂量依赖性,和阴性对照相比,差异具有统计学意义。5.建立人肝癌LM3裸小鼠移植瘤模型,干预第10天时,高、中、低剂量(3.3*1010IU、1.0*1010IU、3.3*109IU)干预组平均肿瘤体积均小于非相关对照组,分别为523.0±44.19 mm3 VS 1042±138.8 mm3,P<0.05;546.5±22.41 mm3 VS 1042±138.8mm3,P<0.05;622.4±82.93 mm3 VS 1042±138.8 mm3,P<0.05),此后每个测量时间点,各个干预组的平均肿瘤体积均小于对照组,至治疗第19天,肿瘤体积分别为307.2±22.30 mm3 VS2351±593.7 mm3,P<0.01;704.4±60.18 mm3VS 2351±593.7mm3,P<0.01;1042±50.07mm3VS 2351±593.7mm3,P<0.05;在治疗第10天、13天、16天、19天时四个时间点,高、中剂量(3.3*1010IU、1.0*1010IU)干预组的相对肿瘤体积均显著小于对照组,低剂量干预组(3.3*109IU)和对照组无显著差异。在治疗第16天,高、中、低剂量组的相对肿瘤抑制率分别为24.5%、54.7%、101.1%,第19天时相应各组相对肿瘤抑制率分别为15%、32.7%、64.5%,其中从第16天开始,高剂量(3.3*1010IU)干预组的相对肿瘤抑制率均小于40%,干预效果显著。结果显示Ad-hfgl2-mi RNA对HCCLM3裸鼠人肝癌皮下瘤的生长具有显著的抑制作用。【结论】1.Ad-hfgl2-mi RNA对人肿瘤细胞LM3、Hela、CNE和NCIH460有显著增殖抑制作用2.Ad-hfgl2-mi RNA能下调fgl2蛋白表达,抑制肿瘤生长,为临床药物的开发和肝癌治疗提供了新思路。