[研究背景]肿瘤是除心脑血管疾病外引起患者死亡的主要病因,显著影响患者的生活质量和加重经济负担。现全球每年约有75万新发肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)患者,超过60万患者死于该病,使得HCC已成为全球范围内引起癌性死亡的第二大原因。而中国新增HCC数目已占据全球数量的一半,使其在中国已成为第二大恶性肿瘤,引起了医患的共同关注。但由于外科手术或微创介入术后仍有较高的复发率,HCC患者总体5年生存率较低。因此,早期发现以及及时评估HCC的治疗效果和预后变得尤为重要。目前临床上仍较为广泛的运用传统临床病理学参数(肿瘤形态学和组织学)结合肿瘤分期来判断HCC的进展和预后。但当一些微小病灶无法被影像学技术所识别或远期转移病灶未形成时,上述指标将无法及时判断HCC的进展,一定程度上会对疾病的诊治造成延误,因此该参数并非判断HCC发生和进展的早期、敏感指标。由于HCC治疗手段有限,复发率和病死率极高,临床亟需开展新的检测手段来识别HCC患者对抗肿瘤治疗的反应和疾病进展。循环肿瘤细胞(Circulatingtumor cells,CTCs)是因自发或有创性操作从肿瘤病灶脱落进入到外周血液中能以单细胞或癌细胞团(Circulating tumor microemboli,CTM)形式所存在的各种类型细胞总称。非肿瘤患者外周血中儿乎无法检测到CTCs,而在肿瘤患者中可有数百万～数千万个肿瘤细胞可从病变组织中脱落进入循环系统。但是,CTCs的存在并不一定表明机体内有转移性癌灶的形成。因为体内通过微循环的调节和分子结构及受体分布的变化可使绝大多数进入外周循环的CTCs发生凋亡或被巨噬细胞吞噬消化,仅有一部分CTCs可发生上皮-间质转变(Epithelial mesenchymal transition,EMT)过程,使生存率低的上皮细胞表型向迁移能力强的间质细胞表型转换,最终形成病灶。因此,CTCs发生EMT转换在恶性肿瘤转移过程中发挥着重要作用。依赖于新型检测技术发现外周循环中CTCs和其EMT过程,能为临床医生判断治疗效果和评估远期预后提供更详细的数据,将更加有利于肿瘤科医生利用肿瘤分子或基因表型调整治疗方案。此外,相对于绝大多数有创性操作而言,检测血液中CTCs具备无创性、重复性和简便操作性,这能减少患者因有创性操作带来的痛苦和心理压力,一定程度上能提高生活质量。因此,CTCs被命名为”液态活组织”。CTCs作为原发灶和转移灶之间的连接、肿瘤生物学和转移的窗口,不仅可能成为指导个体化肿瘤诊疗的一个不可替代的生物标志物,而且也可能是研究肿瘤转移复发过程和机制的一个重要切入点。[研究目的]我们应用RNA原位杂交和纳米过滤有机结合的技术来探究CTCs的EMT过程与HCC之间的关系,同时探究不同表型CTCs对HCC的诊断价值。[研究方法]纳入2015年7月至2015年12月间在广东省人民医院肿瘤中心介入科首诊的HCC患者33位和健康志愿者10位。抽取入组人群5ml血液,采用广州益善生物股份有限公司开发的优化CanPatrolrM CTCs富集技术分离血液中CTCs,采用纳米级别的过滤筛截留CTCs,运用多重RNA探针原位分析技术识别EMT过程中的相关标志物以便区分不同表型的CTCs,进而明确HCC患者血液中不同表型CTCs与肿瘤数目、肿瘤大小等各临床特性之间的关系。[研究结果](1)HCC患者中CTCs阳性病例数和CTCs计数:33位HCC患者血液中均能检测到CTCs,阳性率为100%。CTCs的数量为17.84(2-81)个,其中上皮型、上皮间质混合型和间质型CTCs的数目分别为:0.82(0-5,4.59%),13.82(1-75,77.41%)和 3.21(0-21,17.99%)。(2)上皮型CTCs数目与肝内最大肿瘤直径相关(r=0.456,P=0.008),上皮间质混合型CTCs数目与肝内癌灶个数相关(r=0.421,P=0.015),间质型CTCs数目与是否发生肝外转移及巴塞罗那肝癌临床分期相关(r=0.375,P=0.017;r=0.395,P=0.023)。而其他HCC临床病理特性如年龄、性别、血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)与CTCs数目无显著的相关性。[研究结论](1)优化的CanPatrolTM系统在HCC患者CTCs的检测中具有较高的敏感性。(2)上皮间质混合型CTCs在HCC患者的EMT过程中有着较为重赛的作用。混合型CTCs数目增多很可能提示了肝内转移;间质型CTCs数目的增多很可能提示了肝外转移;而上皮型CTCs数目的增多则可能提示原发肿瘤体积较大。