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目的:Ras相关蛋白7(Rab7)主要存在于晚期内体和溶酶体等细胞器上,有研究报道,Rab7可能促进大脑的缺血/再灌注(I/R)损伤,但是相关机制尚未清楚阐明,因此,本课题主要研究Rab7对体内和体外脑缺血再灌诱导的胶质瘢痕形成的影响及其作用机制。方法:在体内建立短暂性大脑中动脉阻塞(transient middle cerebral artery occlusion,tMCAO)模型,缺血90分钟后再灌注2 h,4 h,6 h,1 d,7d,14 d和28 d,以Western blotting和免疫组化的方法检测Rab7和胶质瘢痕蛋白GFAP,phosphacan和neurocan的表达情况。对缺血再灌注后SD大鼠每星期腹腔注射一次Rab7受体拮抗剂CID1067700(250μg/kg),连续四周(28天),每周检测一次行为学,再灌注7天后用Western blotting的方法检测大鼠给予CID1067700后对胶质瘢痕相关蛋白GFAP和phosphacan表达情况的影响,脑萎缩体积在再灌注28天时测量。在体外培养原代星形胶质细胞并建立氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)再复氧(reoxygenation,Re)模型(OGD/Re),在 OGD 前 30 分钟给予 CID1067700,OGD结束后再复氧时再次给予CID1067700,对细胞进行OGD6h-Re12h和OGD6h-Re24h这两个时间点处理,用乳酸脱氢酶(LDH)法检测加入CID1067700后是否对OGD/Re导致的星形胶质细胞损伤有保护作用以及用Western blotting和免疫荧光法检测加入CID1067700后对胶质瘢痕标志蛋白GFAP,phosphacan和neurocan表达量的影响以及加入 CID1067700 对 Rab7-Lamp1,Rab7-cathepsin B,Lamp1-cathepsin B 共定位的影响;同时用AO染色法检测加入CID1067700后对OGD/Re星形胶质细胞中溶酶体膜的通透性的影响。结果:在体内实验中,缺血90分钟再灌注7d时,Rab7在梗死边缘区GFAP+细胞中的表达达到高峰,同时,梗死边缘区的胶质瘢痕相关蛋白GFAP,phosphacan和neurocan的表达水平也达到最高,在再灌注14天后有所降低;并且CID1067700能明显降低再灌注7天后梗死边缘区GFAP,phosphacan和neurocan的表达水平,减少再灌注28天的大鼠脑萎缩体积并改善行为学症状。和体内结果相一致,OGD/Re实验结果显示,Rab7与胶质瘢痕相关蛋白GFAP和phosphacan变化一致,在OGD6h-Re24h表达最高。同样,同样,CID1067700能降低OGD/Re星形胶质细胞中GFAP,phosphacan和neurocan的表达并且降低OGD/Re诱导的星形胶质细胞LDH的漏出率。AO染色结果证明CID1067700能稳定溶酶体膜,进一步的研究证明CID1067700能够降低Lamp1,cathepsin B的表达并且抑制cathepsin B从溶酶体释放到细胞质中。结论:Rab7受体拮抗剂能够有效减少脑缺血再灌注诱导的脑萎缩体积并改善行为学症状;Rab7受体拮抗剂抑制缺血性脑中风诱导星形胶质细胞增生和胶质瘢痕的形成,并保护星形胶质细胞,这可能与其抑制缺血再灌注后cathepsin B的激活和从溶酶体释放到细胞质中并对溶酶体膜起到稳定作用有关。