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研究背景:糖尿病肾病(Diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病严重的微血管并发症之一。近年来全世界范围内DKD的发病率逐渐上升,截至2017年,全球已有4.25亿成年糖尿病患者,中国大约有25%-40%的糖尿病患者最终会发展为糖尿病肾病。由于糖尿病肾病为社会经济带来的巨大负担,对它的诊断和管理在临床和社会中都具有重大意义。现阶段临床中尽管通过优化降糖、降压,合理应用ACEI、ARB等综合诊治手段有效的延缓了糖尿病肾病的进展,但是,依然无法有效的降低ESRD的新发生率。由于多种并发症混杂发生,对比其他肾脏疾病,治疗糖尿病肾病引发的终末期肾脏病更困难。然而糖尿病肾病的发病机制至今尚未明了,进一步揭示糖尿病肾病的发病机制,寻找新型DKD治疗靶点是目前研究的热点。MicroRNA是一类大约22nt的非编码RNA,它可以通过与靶基因的3’端非编码区(3’UTR)结合,诱导靶基因降解或抑制其翻译,在多种生理和病理过程中发挥重要作用。在肾脏中,miRNA参与调节了与水稳态,渗透调节,肾素生成,近段小管钠和钾的处理,钙感应以及肾脏的发育甚至衰老等相关的基因表达。近些年来与DKD发病相关的研究中发现,miRNA可通过调节炎症、纤维化、细胞外基质沉积和氧化应激等相关基因的表达,以多种方式参与糖尿病肾损伤,影响糖尿病肾病的发病与预后。microRNA与糖尿病肾病的发病机制密切相关,可作为DKD早期诊断、病情监测及治疗的新型潜在生物标记物。而在我们的前期研究中发现糖尿病肾病患者血清中miR-155表达水平减低;其表达与eGFR呈正相关,与尿蛋白排泄率呈负相关。也有不少的研究发现,糖尿病肾病患者的血清、尿液和肾组织中miRNA表达水平异常,所以我们认为miR-155可能与是糖尿病肾病潜在的诊断标志物和治疗靶点。研究目的:探讨miR-155在db/db 2型糖尿病小鼠和STZ诱导的1型糖尿病小鼠血清和肾组织中的表达,以及miR-155在糖尿病肾病发生发展中的作用。研究对象和方法:本文以db/db 2型糖尿病小鼠、STZ造模的1型糖尿病小鼠作为研究对象,并设C57小鼠为对照组。本研究选用4周龄雄性C57/BL小鼠,采用腹腔注射STZ(60mg/kg)连续三日诱导T1DM动物模型,正常饮食饲养三天后测量随机血糖,连续测量3天后纳入随机血糖>180mg/dL(16.7mmol/L)小鼠作为1型糖尿病STZ模型组。各组小鼠再随着周龄的增长随机分为6、8和10周龄组,使用real-time qPCR测定6、8和10周龄时各组小鼠血清和肾组织miR-155的表达;通过免疫组化、real-time qPCR和western-blot测定各组小鼠肾组织中Ets-1、eNOS、AGTR1 mRNA和蛋白的定位及表达水平。结果:1.与对照组相比,6、8和10周龄db/db小鼠和STZ模型小鼠血清中miRNA-155的表达均升高(P<0.05),10周龄时升高最明显(P<0.01),其次为8周龄,6周龄。2.与对照组相比,6、8和10周龄db/db小鼠和STZ模型小鼠肾组织中miRNA-155的表达均上调(P<0.05),10周龄时上调最明显(P<0.01),其次为8周龄,6周龄。3.与对照组相比,6、8和10周龄db/db和STZ模型小鼠肾组织中Ets-1、eNOS和AGTR1 mRNA的表达水平均减低(P<0.05),10周龄时下调最为明显(P<0.01),其次为8周龄,6周龄下调水平最低。4.免疫组化结果提示,Ets-1、eNOS和AGTR1定位于小鼠的肾小球内皮细胞中。5.WB结果提示,与对照组相比,6周龄db/db小鼠肾组织Ets-1、eNOS和AGTR1均无明显变化;8周龄db/db小鼠肾脏中eNOS蛋白表达水平下调(P<0.05);10周龄AGTR1蛋白表达水平下降(P<0.05),Ets-1和eNOS蛋白表达水平均明显下调(P<0.01)。与对照组相比,6周龄STZ模型小鼠肾组织eNOS表达下调(P<0.05),Ets-1和AGTR1均无明显变化;8和10周龄STZ小鼠肾脏中Ets-1、eNOS和AGTR1蛋白表达水平均显著下调(P<0.01),10周龄时下调最为显著。结论:db/db和STZ模型小鼠的血清和肾组织中miRNA-155的表达水平随着DKD的进展逐渐升高,而miR-155的靶点Ets-1、eNOS和AGTR1的mRNA和蛋白质的表达水平随着糖尿病肾病的进展表达逐渐减低。这一结果提示了miRNA-155可能通过抑制其靶基因Ets-1、eNOS和AGTR1,影响内皮细胞功能而参与糖尿病肾病的发生和发展。