基于多种类型功能基因高通量筛选嗜盐放线菌及潜力菌株的异源表达初探

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随着新疾病不断涌现,耐药菌的逐渐增多,人类亟需加速新药开发。微生物来源的药物一直是新药发现的主要来源,但普通环境来源的微生物已经不能满足其要求,人们把更多的目光转移到极端环境微生物的研究上。嗜盐放线菌作为极端微生物资源的重要组成部分,蕴含着相当丰富而特殊的活性次级代谢产物。目前,长时间的研究已经积累了丰富的嗜盐放线菌物种,但是由于发酵产物不稳定等因素,嗜盐放线菌代谢产物上的研究显得相对滞后。基于前期分离的大量嗜盐放线菌上,首先建立了一个500株的待筛选的菌种库,进而提取其基因组DNA建立了DNA库。接下来选取4个类型天然产物关键基因,利用简并引物(Degenerate primers),通过巢式PCR扩增等设计并制作了地高辛标记的特异性探针,运用高通量技术对基因组DNA进行筛选,最终筛选出大量具有不同类型功能基因的阳性菌株,综合分析后发现,其中31株菌含有多种类型的功能基因,这样的潜力菌株可能具有产生多种化合物的能力,也可能含有新的化合物。为了进一步探索这些潜力菌株中蕴含的基因簇资源,本研究选取了2株最具潜力的菌株YIM96935和YIM96633进行全基因组测序;利用生物信息学软件进行分析,最终发现这2株菌可能分别含有5个和16个生物合成基因簇,部分基因簇与已知基因簇具有一定相似性,这些已知基因簇编码了多种不同类型的化合物,其中一些化合物具有较好的抗肿瘤、抗氧化、抗菌、抗炎症以及免疫抑制活性。大部分新基因簇与已知基因簇相似度较低,可能编码合成结构新颖的活性天然产物。此外本研究还对这2株潜力菌的异源表达进行了前期探索。本研究以嗜盐菌为对象,建立了适合该类菌株的高通量筛选方法,获得了潜力菌株并通过生物信息学证明了筛选方法的有效性,为部分解决该类资源开发难的难题奠定了坚实的基础。
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