【摘 要】
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目的:通过研制sCD154酶联检测试剂盒、检测ITP儿童外周血CD4~+T细胞表面CD154、CD69的表达、循环的IL-4、IL-6和sCD154水平,来探讨ITP可能的免疫病理机制,并为ITP和血小板相
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目的:通过研制sCD154酶联检测试剂盒、检测ITP儿童外周血CD4~+T细胞表面CD154、CD69的表达、循环的IL-4、IL-6和sCD154水平,来探讨ITP可能的免疫病理机制,并为ITP和血小板相关性疾病的辅助诊断、疗效估价和预后判断提供有价值的实验室参数。 方法:以纯化的1B1为包被抗体、生物素标记的4F1为检测抗体、重组人可溶性CD154为标准抗原建立双抗体夹心sCD154酶联检测系统:分离获得30例ITP儿童外周血单个核细胞,通过免疫荧光流式术检测治疗前ITP儿童外周血CD4~+T细胞表面CD154、CD69的表达;同步采集其血清和血浆,酶联试剂盒检测肾上腺皮质激素或/和静脉大剂量丙种球蛋白治疗前后循环的IL-4、IL-6和sCD154水平。 结果:1)本室建立的双抗体夹心sCD154的酶联检测方法,具有较好的稳定性、较高的准确性和灵敏度。2)应用该检测系统测定同步采集的健康儿童外周血血清和血浆,结果表明,血清sCD154含量为9.23±4.64 ng/ml,明显高于所对应血浆sCD154的含量(2.81±1.19ng/ml),两者之间有显著性差异(P<0.05)。3)ITP患儿治疗前后血清sCD154的含量分别为2.61±1.26ng/ml,5.25±1.84ng/ml,两者之间差异显著(P<0.05),但明显低于健康儿童血清sCD154水平(9.23±4.64ng/ml)。4)免疫荧光流式术检测结果显示,ITP患儿外周血CD4~+T细胞表面CD154的表达率为16.7%±8.1%,明显高于健康儿童CD4~+T细胞CD154的表达(4.3%±2.9%),两者之间差异显著(P<0.05)。5)ITP患儿治疗前后血浆IL-4水平分别为:18.57±9.3pg/ml、15.18±8.17pg/ml,均明显高于正常对照组(8.32±5.12pg/ml),之间有显著性差异(P<0.05)。6)ITP忠儿治疗前后血浆IL-6水平分别为:19.24±8.87pg/ml、13.7±6.12pg/ml,均高于正常对照组(10.81±5.42pg/ml),三者之间有显著性差异(P<0.05)。 结论:本室建立的双抗体夹心sCD154的酶联检测方法,具有较好的稳定性、
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