绵羊肺炎支原体(Mycoplasmaovipneumoniae，Mo)是引起绵羊、山羊、尤其是羔羊增生性间质性肺炎的病原体。为研究Mo的生长特性、分子流行病学以及免疫原性，本研究通过对我国绵羊肺炎支原体病制苗菌株MoGH3-3株生长曲线进行了测定，同时将其在几种常用培养基中的培养特性进行了比较；对分离于国内的25株Mo及Mo模式株Y98株的基因组DNA采用随机扩增多态性DNA（PAPD）、限制性片段长度多态性（RFLP）、扩增片段长度多态性方法进行基因多态性分析（AFLP）；并对分离株进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析，同时对分离于8个地区的8株绵羊肺炎支原体进行免疫印迹（Western-blot）分析；对MoGH3-3株进行免疫蛋白组学研究鉴定免疫原性蛋白；对所鉴定免疫原性蛋白基因进行扩增、序列分析，再进行克隆表达和纯化蛋白后，通过免疫印迹及其小鼠免疫试验对其免疫学活性进行检测。研究发现：　　1．我国绵羊肺炎支原体并灭活疫苗制苗菌株MoGH3-3经稳定传代后，在改良KM2培养基中培养12h开始进入对数生长期，培养72h进入稳定期，培养120h时进入衰亡期。　　2．MoGH3-3菌株在改良KM2培养基、TSB-1培养基、改良Thiaucourt氏培养基和10％马血清改良KM2培养基中不同培养阶段的生长滴度（颜色变化单位）不同，在培养24、48、72、96h，MoGH3-3株在TSB-1培养基中的平均生长滴度高于其他三种培养基。在培养的72h和96h，在TSB-1培养基中平均最大生长滴度达到了109ccu/ml，在改良KM2培养基和改良Thiaucourt氏培养基中只有108ccu/ml，而在10%马血清改良KM2培养基中仅为106ccu/ml。　　3．26株菌的RAPD、RFLP及AFLP基因组多态性图谱进行了聚类分析结果为：在相似系数为0.70时，26株Mo可分成6个RAPD、6个RFLP群及5个AFLP群；相似系数为0.90时，分成18个RAPD、18个RFLP群及17个AFLP群，相似系数为1.00时，分成25个RAPD、26个RFLP群及26个AFLP群。提示我国Mo存在高度的基因多态性，这种多态性与地域差异相关，与宿主来源也具有一定的相关性。　　4．分离于国内不同地域的25株Mo菌株的SDS-PAGE蛋白模式在相似系数0.85的水平上，可将其根据不同地域来源分成8个SDS-PAGE蛋白模式群，表明我国Mo分离株蛋白模式存在地域差异。　　5．对8个SDS-PAGE蛋白模式群中不同省区的8株Mo菌的菌体蛋白进行了SDS-PAGE研究，并用Mo模式株Y98高免血清对不同地区分离的代表菌株进行了免疫印迹分析。结果不同分离株免疫印迹出现分子质量分别为105kDa、83kDa、65kDa、42kDa、40kDa和26kDa共6条免疫原性蛋白带，但83kDa和40kDa处条带为所有菌株共有。结果表明，我国不同地区分离的代表菌株主要免疫原性蛋白存在不同程度差异，但83kDa和40kDa的2个蛋白为所有分离株共有主要免疫原性蛋白。　　6．通过2-DE建立MoGH3-3株蛋白图谱，利用Western-blot筛选出MoGH3-3株免疫原性蛋白，并采用MALDI-TOF-MS鉴定免疫原性蛋白。MoGH3-3株的主要免疫原性蛋白点有3个，其中2个为延伸因子Tu（ElongationfactorTu，EF-Tu），1个为丙酮酸脱氢酶E1-a亚单位（PyruvatedehydrogenaseE1-alphasubunit，PDHA）。结果表明，EF-Tu及PDHA是Mo主要的免疫原性蛋白。该结果将为Mo新型疫苗的研究提供理论依据。　　7．Mopdha基因经扩增、克隆、表达及免疫学活性分析结果为pdha基因全长1125bp，编码375aa，G+C%为34.76%，第304-306位、379-381位、586-588位、592-594位、625-627位、811-813位、889-891位及964-966位TGA在支原体中编码色氨酸而不是作为终止密码子；基因序列比对及进化树分析显示，Mopdha基因与10种支原体的pdha基因序列同源性为32.6%-85.3%，氨基酸序列同源性为39.3%-90.6%，基因序列和氨基酸序列均与猪肺炎支原体的同源性最高，分别为85.3%和90.6%；Mopdha基因在33℃、IPTG浓度为0.25mmol/L诱导6h的表达条件下，表达量最高；重组的PDHA蛋白可与Mo高免血清发生反应，在免疫后血清抗体效价与对照组相比，均显著升高（P<0.05），表明具免疫学活性。　　本研究首次了解了Mo的培养特性，探明了我国Mo的分子流行病学情况，同时对Mo的免疫原性进行了初步的研究，这些结论将为为绵羊肺炎支原体病的诊断技术开发和疫苗研制奠定理论基础。