第一部分背景椎间盘退变（intervertebral disc degeneration,IVDD）引起的颈肩腰腿痛已成为一个严重影响人们身体健康的全球性难题,目前仍缺乏长期有效的治疗手段。近年来,致力于提高椎间盘内源性修复能力的生物治疗已得到重视。髓核间充质干细胞（nucleus pulposus mesenchymal stem cells,NPMSCs）通过向类软骨细胞分化及旁分泌作用修复退变椎间盘组织。SIRT1是一种去乙酰化酶,有防止细胞衰老、凋亡等作用,SIRT1基因敲除可以增加包括IVDD等多种疾病中MCP1的表达,从而加重症状。因此,我们认为:SIRT1的激活可以促进NPMSCs软骨分化并可能通过MCP1/CCR2轴减少NPMSCs的凋亡。目的研究SIRT1对NPMSCs的MCP1/CCR2信号轴以及软骨分化和凋亡的影响;方法从IDD患者获取NPMSCs,然后,用SIRT1激活剂、单核细胞趋化蛋白1（MCP1）和趋化因子受体2抑制剂处理,检测NPMSCs的生长、增殖、软骨分化和细胞凋亡指标。随后建立大鼠的IDD模型并移植转染过表达SIRT1的NPMSCs。结果在IDD患者的NPMSCs中发现SIRT1的上调可以促进MCP1/CCR2轴的下调、软骨分化以及细胞凋亡减少。此外,MCP1可以逆转过表达SIRT1诱导NPMSCs的软骨分化和对细胞凋亡的抑制。在大鼠IDD模型中检测到NPMSCs凋亡增加和软骨分化减少,且检测到SIRT1表达减少,而MCP1和CCR2的表达增加。此外,移植了过表达SIRT1的NPMSCs的大鼠,其IDD的症状减轻。结论SIRT1的过表达可以促进NPMSCs软骨分化并减少细胞凋亡,其通过抑制MCP1/CCR2轴来减轻大鼠的IDD的症状。第二部分背景前期研究发现SIRT1的激活通过下调MCP1/CCR2轴促进IVDD患者NPMSCs的软骨分化和抑制细胞凋亡。有研究显示,退变椎间盘高表达MCP1,但相关报道甚少。为寻找更多治疗IVDD的靶点,我们需了解MCP-1在椎间盘退变过程中对NPMSCs有何作用及作用机制,因此我们在本课题中进行了探讨。目的:1、证实退变椎间盘高表达MCP1;2、研究MCP1对NPMSCs增殖、凋亡、迁移及软骨分化的影响;3、初步探讨MCP1/CCR2轴的下游信号通路。方法通过酶消化法成功分离和培养人NPMSCs,并鉴定其形态、细胞表型和三系分化能力。荧光定量PCR技术和酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）用于检测NPMSCs在促炎因子刺激下,MCP-1在转录和蛋白水平上的表达变化。CCK8试剂盒用于检测细胞增殖能力。使用划痕实验来检测NPMSCs的迁移能力。同时检测了 Sox-9、蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的转录和蛋白水平的表达变化。结果人NPMSCs在促炎因子刺激下,可显著增加MCP-1在mRNA和蛋白水平的表达。MCP-1抑制NPMSCs的增殖,其具有浓度依赖性（即浓度越高,抑制作用越强）。同时发现,MCP-1在体外抑制NPMSCs的软骨分化,这种抑制作用可以通过MCP-1影响软骨球大小（视觉观察）和重量以及影响蛋白聚糖、Ⅱ型胶原的基因和蛋白表达变化证实。此外,MCP-1还可以上调NPMSCs内（或质膜）CCR2受体的表达。用CCR2拮抗剂RS504393可以显著减轻MCP-1对髓核干细胞软骨分化的抑制作用。结论MCP1通过MCP1/CCR2轴抑制人NPMSCs的软骨分化。