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目的:前瞻性观察高通量连续性血液滤过治疗(HVHF)对严重脓毒性症患者外周血单个核细胞中miRNA-146a表达的影响,并探讨HVHF治疗对脓毒症发挥作用可能的机制。
方法:将2011年3月至2012年9月入住该院重症医学科,符合纳入标准的在接受常规治疗同时接受HVHF治疗的严重脓毒症患者15例,设为HVHF组,另选15例患者与HVHF组配对的性别相同,年龄和APACHEⅡ评分相近,符合纳入标准的但因某些原因未能行HVHF治疗而其余治疗措施相同的严重脓毒症患者作为对照组。常规治疗指原发病的治疗、抗生素、血管活性药物、营养对症支持治疗、维持水电解质酸碱平衡及机械通气等治疗;HVHF治疗指在常规治疗的基础上联合高通量血液滤过(HVHF)治疗,置换量设为4L/h;
1.在两组治疗过程的0h,6h,12h,24 h,48 h时相点,抽取患者外周静脉血,用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,用RNA提取试剂盒(miRNeasy MiniKit)提取总RNA,荧光定量PCR法检测miRNA-146a表达量的变化。
2.两组患者入科接受治疗24 h后分离出外周血单个核细胞并于体外培养,以脂多糖(LPS)刺激,分别在4h、8h、12h、24 h、48 h时相点收集单个核细胞并检测单个核细胞中miRNA-146a表达量的变化;同时以ELISA法检测单个核细胞培养液中TNF-a,IL-6,IL-10水平。
结果:
1、两组患者外周血单个核细胞的miRNA-146a表达水平变化:两组患者外周血单个核细胞miRNA-146a表达量较治疗前均有所下调,但HVHF组较对照组下调更显著;
2、两组患者体外培养的单个核细胞分泌功能变化:HVHF组体外孵育的外周血单个核细胞在LPS刺激下于各个时相点培养液中TNF-a、IL-6的分泌水平均明显高于对照组;HVHF组TNF-a、IL-6分泌量在12h达最高值,而对照组在8h即达最高值;两组细胞IL-10分泌水平均持续升高,两组间各时相点IL-10分泌水平无明显差异;
3、两组患者体外培养的单个核细胞miRNA-146a表达变化:HVHF组体外孵育的外周血单个核细胞在LPS刺激下miRNA-146a表达量较孵育前有所升高,在12h时相升高明显,对照组在孵育前及孵育4、8h时相点miRNA-146a表达都处于高水平状态,明显高于同时相的HVHF组。
结论:高通量连续性血液滤过治疗(HVHF)通过大量清除脓毒症患者血循环中的炎症因子及促炎介质及下调单个核细胞部分miRNA-146a的表达水平,减轻严重脓毒症患者外周血单个核细胞的免疫抑制状态,使部分免疫功能得到恢复,这可能是HVHF参与机体免疫内稳状态的重建的作用机制之一。