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干扰素α-2b(IFNα-2b)是具有广泛生物学活性的细胞因子，具有抗病毒、抑制肿瘤细胞增生、调节人体免疫功能等作用。该蛋白在基因重组的大肠杆菌中以包涵体的形式表达，需经体外重折叠复性恢复成具有天然构象的活性蛋白。层析复性技术是近年来出现的一个新的复性方法，由于它能显著地改进复性产率，而且能将复性与分离纯化合为一步，降低下游成本，所以是当前生物技术中的一个研究热点。本文采用层析复性方法，对重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)的复性进行研究，并对复性条件进行优化，与常规的透析复性方法相比较，以期为蛋白质复性提供一种简便且适宜大规模应用的方法。用5L发酵罐制备得到了重组人干扰素α-2b包涵体，经过破胞离心，1L发酵液可以得到2.4g粗制包涵体。重组人干扰素α-2b包涵体经多次洗涤后，溶于含6mol／L盐酸胍的溶解液中，蛋白纯度可达60％左右。利用盐酸胍浓度梯度体积排阻层析(SEC)法对重组人干扰素α-2b进行复性。通过考察线性盐酸胍梯度下盐酸胍终浓度、梯度长度、流速、复性液中还原型／氧化型谷胱甘肽(GSH／GSSG)比例等因素，探索了盐酸胍梯度凝胶层析柱复性rhIFNα-2b的优化条件。结果表明，复性后rhIFNα-2b的蛋白回收率是透析复性法的1.5倍，蛋白活性收率为68.7％，比活为1.77×10~8IU／mg，纯度高达94％。以盐酸胍浓度梯度离子交换层析(IEC)作为蛋白质复性系统，能有效地复性重组人干扰素α-2b，并在复性的同时对蛋白进行了纯化。在流速为0.5ml／min，盐酸胍终浓度1.5mol／L，上样量为2.24mg的条件下，复性后重组人干扰素α-2b的比活为1.13×10~8IU／mg，蛋白回收率51.2％，蛋白活性收率为46.3％，纯度高于90％。疏水层析(HIC)法复性重组人干扰素α-2b。当流速为1ml／min，Buffer A和Buffer B中盐酸胍浓度为2mol／L，上样量为0.644mg时，复性后rhIFNα-2b的比活为2.34×10~8IU／mg，蛋白回收率37.2％，蛋白活性收率为57.2％，纯度高达92％。