梅里雪山土壤微生物多样性及其抑菌活性研究

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梅里雪山国家公园是世界自然遗产“三江并流”自然保护区的核心区域,蕴藏着丰富的微生物资源,目前国内外对梅里雪山雨崩地区微生物的多样性研究尚属空白。本研究共采集了梅里雪山雨崩地区的62份土壤样品,开展其微生物多样性研究,采用ASV聚类分析对样品中的真菌和细菌群落结构进行Mi Seq高通量测序分析。结果表明,该地区真菌、细菌物种多样性随海拔升高而降低,且冬、夏两季物种多样性整体差异不显著;冬、夏两季土壤真菌和细菌群落组成差异较大,与冬季相比,夏季三个不同海拔土壤真菌和细菌群落差异更大些。从物种组成来看,真菌伞菌纲(Agaricomycetes)为优势类群,其次是锤舌菌纲(Leotiomycetes)、座囊菌纲(Dothideomycetes)、银耳纲(Tremellomycetes)和古根菌纲(Archaeorhizomycetes),它们的相对丰度随季节变化明显。其中,锤舌菌纲(Leotiomycetes)和座囊菌纲(Dothideomycetes)的相对丰度还随海拔变化明显;细菌α-变形杆菌纲(Alphaproteobacteria)为优势类群,其次是放线菌纲(Actinobacteria)、γ-变形杆菌纲(Gammaproteobacteria)等,其中γ-变形杆菌纲(Gammaproteobacteria)、酸杆菌纲(Acidobacteria)、热嗜油菌纲(Thermoleophilia)、拟杆菌纲(Bacteroidia)、Blastocatellia和绿弯菌纲(Chloroflexia)6个类群相对丰度随海拔变化差异显著。采用甘油-天冬酰胺琼脂、腐殖酸琼脂和柠檬酸盐琼脂三种分离培养基对土壤中的放线菌进行纯培养,共得到552株放线菌,属于9目、15科、30属、176种(其中21株为潜在新物种);采用改良马丁琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、沙氏琼脂三种分离培养基对土壤中的真菌进行纯培养,共得到1335株真菌,属于4门、11纲、37目、93科、208属、422种(其中93株为潜在新物种)。通过形态学和系统发育分析对比,鉴定并描述了子囊菌门(Ascomycota)-锤舌菌纲(Leotiomycetes)-柔膜菌目(Helotiales)-四枝孢霉属(Tetracladium)的1个新种,命名为Tetracladium meiliense sp.nov.。以草茎点霉(Phoma herbarum)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、黄瓜萎蔫病菌(Plectosphaerella cucumerina)、人参链格孢(Alternaria panax)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、黑附球菌(Epicoccum nigrum)、白色念珠菌(Candida albicans)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和耐氨苄青霉素、耐卡那霉素及耐链霉素粪产碱菌(Ampicillin-resistant,Kanamycin-resistant,Streptomycin-resistant Alcaligenes faecalis subsp.phenolicus)共11株指示菌为靶标,对779株真菌、179株放线菌进行了抑菌活性测定,结果表明,有42株真菌(占5.4%)对11株指示菌表现出广谱拮抗活性;13株放线菌对4株指示细菌表现出拮抗活性;15株放线菌对7株指示真菌表现出拮抗活性。
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