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马腺疫作为一种急性接触性传染病,可引起马属动物颌下淋巴结肿胀,严重时可致死,该病给世界各地养马产业造成严重的经济损失。马腺疫主要由马链球菌马亚种(Streptococcus equi,S.equi)引起,SrtA是该菌的重要毒力因子,具有高度保守性,通过识别LPXTG分泌蛋白,将其共价连接到细胞壁肽聚糖上。新疆作为全国重要养马区,随着马养殖规模的扩大,已受到该病的严重危害。本研究以新疆分离S.equi分离株ZZM-2,ZZM-3的基因组为模板,扩增得到SrtA(750 bp)基因片段,构建原核表达重组体p ET-28a-SrtA-2,p ET-28a-SrtA-3,经SDS-PAGE电泳及Western blot检测表达蛋白,结果表明,诱导表达并纯化出SrtA-2,SrtA-3显示蛋白分子量大小约为27 k Da,Western blot表明重组蛋白具有反应原性。以纯化的SrtA-2,SrtA-3并与本室以往纯化的类M蛋白(SeM)与Ig G结合蛋白(EAG)分别及联合免疫小鼠,检测小鼠血清抗体水平效价与抗体类型,检测结果显示,SrtA-2、SrtA-3、SeM、EAG免疫组抗体效价达到1:13500,SeM+EAG+SrtA-3免疫组抗体效价达到1:72900,高于其他各免疫组的抗体效价。抗体亚型检测结果显示,不同蛋白免疫后Ig G1与Ig G2b抗体明显升高,高于Ig G2a与Ig G3,表明SrtA、SeM、EAG的免疫小鼠诱导Th2型免疫应答。以S.equi攻击免疫小鼠,测定对照及免疫组各脏器荷菌量,病理组织学观察和攻击存活率检测。结果显示SrtA-3免疫组对肺的保护效果高于SrtA-2,心、肝、脾和肾保护效果低于SrtA-2免疫组,EAG+SeM+SrtA-3免疫组各脏器荷菌量及病理组织学与对照组相比保护效果最好。小鼠攻击保护实验结果显示SrtA-2存活率为87.5%,SrtA-3存活率为75%;EAG+SeM+SrtA-3免疫组存活率为87.5%,SeM免疫组存活率为62.5%;本研究以EAG与SrtA-3检测对不同菌株的存活率,EAG与SrtA-3免疫组对S.equi ZZM-2、ZZM-3、5012、84-3、ZTT-MY-1的存活率在50-80%,对S.zooepidimicus ZTT-SY-1以及MXH-SY-1存活率只有25%。SeM+EAG+SrtA-3免疫组攻击后小鼠体重下降至第4 d开始恢复,第9 d恢复之前体重,效果优于单独免疫组。流式细胞及荧光定量PCR对免疫小鼠脾脏淋巴细胞及免疫相关分子进行检测,结果表明SrtA免疫后可刺激小鼠CD4~+T、CD8~+T、CD69~+T细胞产生,SrtA-2免疫后CD4~+T与CD8~+T细胞含量高于SrtA-3免疫组,CD69~+T表达含量低于SrtA-3组。荧光定量PCR检测结果显示,SrtA-3免疫组IL-10与RP105的表达水平高于SrtA-2免疫组,SrtA-2免疫组MHCⅠ、TCR、TLR2、TLR3及TLR4的表达水平均高于SrtA-3免疫组;利用SeM、EAG及SrtA-3单独及联合免疫小鼠后,荧光定量PCR结果显示EAG免疫组IL-10的表达水平显著高于其他免疫组,SrtA-3与SeM+EAG+SrtA-3免疫组MHCⅠ的表达水平显著增加,SeM+SrtA-3 RP105表达水平显著增加;SrtA-3免疫组TCR、TLR2及TLR4表达水平显著高于其他各免疫组,SrtA-3与SeM+EAG+SrtA-3免疫组TLR3的表达水平显著增加(P<0.05)。本研究成功表达了SrtA不同突变体,通过小鼠模型发现SrtA-2免疫效果优于SrtA-3;不同蛋白EAG、SeM、SrtA-3免疫小鼠,SeM+EAG+SrtA-3三种蛋白联合免疫组保护效果最好,本研究结果为马腺疫的防治提供实验数据。