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目的: 食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是中国江苏北部地区最主要的食管癌组织病理类型,具有极高的发病病率和较高的死亡率。miRAN是重要的表观遗传调控因子,其在肿瘤中具有重要的调节作用。本研究探讨江苏淮安地区食管鳞状细胞癌中miRNA-29家族的表达特征及其相关机制,并初步阐明其生物学功能和在 ESCC 发生、发展中可能的调节作用,为后续研究奠定基础。 方法: 收集自2014年5月~2016年10月解放军第82医院的临床手术切除的ESCC组织和癌旁组织(距癌组织边缘≥5 cm以上)配对标本110对。首先,应用微流体芯片技术对 ESCC 患者的癌组织与其配对的癌旁组织中相对表达含量具有显著差异性的miRNAs 进行初筛。其次应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chainreaction,qRT-PCR)检测ESCC癌组织及癌旁组织中 miRNA-29a/b/c 的表达水平。通过 miRBase、NCBI、UCSC Browser 等在线工具分析 miRNA-29a/b/c 的序列特征;应用 miRanda、TargetScan及PicTar 预测miRNA-29a/b/c共同的靶基因,并结合已证实的靶标基因,进行功能富集分析(Gene Ontology)和信号通路富集分析(Pathway Enrichment);通过双荧光素酶报告系统验证VEGF-A是否为miRNA-29a/b/c的下游直接靶基因。应用免疫化学染色技术检测ESCC患者的癌组织及其癌旁组织中VEGF-A的相对表达含量变化情况,同时将 miRNA-29a/b/c、VEGF-A 的相对表达含量变化情况与ESCC的各项临床信息统计资料之间相结合,运用统计学的方法分析二者的表达含量变化情况与ESCC患者的各项临床信息之间的相关性。 结果: 1. 微流体芯片技术检测结果表明在食管鳞状细胞癌中29条miRNA上调,33条miRNA是下调的。其中miRNA-29a/b/c的表达水平均显著下调; 2. 采用qRT-PCR技术检测的结果也表明ESCC癌组织miRNA-29a/b/c表达水平明显低于癌旁组织(P<0.05); 3. 免疫组织化学染色结果表明ESCC的癌组织中VEGF-A的相对表达含量呈现出明显的上调现象(P<0.05)。 4. 结合ESCC患者的各项临床信息资料进行相关性统计分析,结果表明:ESCC 患者的癌组织中低表达的miRNA-29a/b/c与高表达的VEGF-A都与ESCC细胞的淋巴结转移之间呈现出显著的相关关系(P<0.05)。 5. 采用TargetScan等多个miRNA靶基因的在线数据库及预测软件综合分析 miRNA-29a/b/c 共同的靶基因,结果表明:VEGF-A 作为miRNA-29a/b/c共同的靶基因不仅可以与miRNA-29a/b/c各成员之间进行特异性结合,而且参与了多条 KEGG 信号传导调节通路,由此预测 VEGF-A 可能是miRNA-29a/b/c 各家族成员共同的下游靶基因。 6. 荧光素酶报告基因检测证实了VEGF-A确实为miRNA-29a/b/c各家族成员共同的调控靶基因。 结论: 1. 淮安地区ESCC癌组织中miRNA-29a/b/c表达水平显著低于癌旁组织,而VEGF-A表达水平显著高表达,且两者都与肿瘤的转移密切相关; 2. miRNA-29a/b/c可能通过调控靶基因VEGF-A的表达参与ESCC的病理调节机制。