研究背景和目的根据我国第三次死因回顾调查报告显示，肺癌已成为我国居民肿瘤死因的第1位，占恶性肿瘤的22.7%。肺癌死亡率在过去的30年里增加了464.84%，成为中国增长最快，危害最严重的恶性肿瘤。肺癌中非小细胞肺癌（no-small cell lungcancer，NSCLC）占80%，由于被发现时大多数肺癌患者已发生转移，导致75%患者已失去手术机会。恶性肿瘤细胞浸润能力的增强在恶性肿瘤发展和转移的中扮演一个重要的角色。在这些步骤中，基因、信号传导通路及因子相互作用等共同参与。恶性肿瘤生存预后与转移相关蛋白表达密切相关，寻找与恶性肿瘤转移密切相关的特异性蛋白，可能为临床治疗提供新的靶点。表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）是具有酪氨酸激酶活性的跨膜受体糖蛋白，属于表皮生长因子家族，又被称为ErbB-1、HER1，它由胞外域、跨膜区及胞内域三部分组成；EGFR与其配体结合相形成二聚体，自身发生磷酸化，从而激活下游信号传导通路。与EGFR相关的两条主要信号传导通路：Ras-MAPK信号传导通路，该信号传导通路与细胞增殖激活有关；另一条是PI3K-Akt信号传导通路，该通路与细胞迁移增强有关，并且这条传导通路的激活是上皮间质转化(epithelial Mesenchymal transition，EMT)的核心特征，与肿瘤血管形成，侵袭和转移密切相关。EGFR在恶性肿瘤细胞中异常表达，包括直肠癌、胰腺癌、头颈部癌、胃癌、非小细胞肺癌等。CTEN是tensin蛋白家族中的一员，目前为止tensin蛋白家族成员中共有4个。4个成员在C端均具有PTB结构区域(phosphotyrosine-bindingdomain)和SH2结构区域(SreHomolo2domaln)。研究结果示，SH2结构域可与PI3K、FAK(FocalAdhesion Kinas)和pl30Cas(p13oCrk-associated substrate)相结合，这与许多恶性肿瘤相关。CTEN在2002年被克隆出，CTEN基因位于人17号染色体q21区域；cDNA全长4015bP。人们开始发现CTEN蛋白在前列腺癌组织中表达率下降。然而，越来越多的实验研究表明CTEN蛋白在其它恶性肿瘤组织中呈现高表达状态，如乳腺癌、结肠癌、胃癌等，因此，CTEN被认为在调控恶性肿瘤细胞形态、迁移、信号传导等过程中起重要作用。E-钙黏附蛋白(epithelia cadherin, E-cadherin,E-cad)是细胞粘附分子钙依赖性粘附素家族中一员。 E-cad蛋白表达于上皮细胞，通过参与信号传导和细胞粘附，以调控细胞分化，同时参与维持上皮组织结构完整性及上皮细胞之间粘附力。研究报道，E-cad蛋白在上皮细胞内过表达能够抑制细胞增殖和游走，也能引起细胞凋亡。另外，在恶性肿瘤组织中E-cad蛋白功能发生障碍，导致肿瘤细胞之间粘附力减弱，细胞脱离原发灶而发生局部或远处转移。研究表明，E-cad蛋白在恶性肿瘤中表达下降，其下降机制可能是：E-cad基因突变或缺失、启动子的甲基化、抑制转录、转录后调控等。目前关于EGFR、CTEN和E-cad在NSCLC组织中表达及关系的研究国内外文献报道较少，本实验采用免疫组化SP法检测NSCLC组织中EGFR、CTEN和E-cad蛋白的表达；并分析其表达情况与病理的类型、分化程度、TNM分期及淋巴结转移等临床病理特征的关系；和三者之间的相关性，为NSCLC早期诊断和临床治疗提供新的思路。材料与方法1．研究对象选取我校第二附属医院胸外科2012年3月至2013年3月手术切除NSCLC组织82例和正常肺组织标本54例（病理HE染色均证实）。所有患者术前均未经放化疗及生物治疗，均有完整的临床病理资料。2．研究方法将选取好的石蜡块在切片机上制成4μm厚切片，按免疫组化SP法进行检测，操作步骤严格按试剂盒说明书进行；一病抗均按1:100倍稀释。一抗作空白对照用PBS代替，EGFR，CTEN和E-cad阳性切片作为阳性对照。3.免疫组化结果判定方法用双盲法判定结果，由两位病理科资深医生单独观测每张切片后作出判定，判定水准应用半定量评分法。根据细胞阳性百分比及染色强度准则：染色强度评分：0分无色，1分淡黄色，2分棕黄色，3分为褐色；细胞阳性百分比计分：0为阴性，～10%为1分，～50%为2分，～75%为3分，＞75%为4分。根据染色强度评分与细胞阳性百分比乘积得分≥4分，则为阳性表达。E-cad蛋白的阳性表达情况主要定位于细胞膜和细胞质，呈棕黄色颗粒样物质。E-cad蛋白判断标准：细胞阳性数≥70.0%为正常表达，计为阳性，＜70.0%为异常表达即表达为阴性。4.统计学方法实验所得数据使用SPSS17.0软件进行统计分析：χ2检验正常肺组织和癌组织中三种蛋白表达的差异，同时分析癌组织中三种蛋白的表达与临床病理特征的关系；Spearman相关分析癌组织中三种蛋白关联性；以α=0.05为检验水准。结果1．EGFR、CTEN和E-cad蛋白在正常肺组织、NSCLC组织中的表达EGFR蛋白主要定位于细胞膜和胞质，呈棕褐色颗粒；CTEN蛋白主要表达于细胞胞质，呈淡黄色至棕褐色颗粒；E-cad蛋白主要定位于细胞膜和胞质，呈棕褐色颗粒。EGFR蛋白在正常肺组织和NSCLC组织表达率分别为13.0%和58.5%，两者差异有统计学意义（χ2=33.242P＜0.001）；CTEN蛋白在正常肺组织和NSCLC组织表达率分别为0.0%和69.5%，两者差异有统计学意义（χ2=64.620P＜0.001）；E-cad蛋白在NSCLC组织和正常肺组织表达率分别为28.1%和100.0%，两者有统计学意义（χ2=68.625P＜0.001）。2．EGFR、CTEN和E-cad蛋白在NSCLC组织中的阳性表达与临床病理特征之间的关系EGFR、CTEN和E-cad蛋白阳性表达与患者年龄、性别、病理类型均无关（P＞0.05），与分化程度、TNM分期及淋巴结转移呈显著相关（P＜0.05）。3．NSCLC组织中EGFR、CTEN和E-cad蛋白表达之间的关系EGFR和CTEN蛋白表达的相关性分析呈正相关（r=0.626P=0.000）；EGFR和E-cad蛋白表达的相关性分析呈负相关（r=-0.577P=0.000）；E-cad蛋白和CTEN蛋白阳性表达的相关性分析呈负相关（r=-0.353P=0.001）；结论1. EGFR、CTEN和E-cad蛋白异常表达，在NSCLC发生发展过程中起重要作用。2.目前EGFR已成为NSCLC治疗的靶点之一；CTEN、E-cad作为NSCLC治疗的潜在靶点值得进一步研究。