中国螽(虫斯)总科昆虫的RAPD分析研究

来源 :陕西师范大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:kueixing
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
核酸的分子系统学是从遗传学本质上研究生物之间关系的最精确、最直接的方法,由于核酸的分子标记具有信息含量大、可供选择的分子类型多、易于确定同源关系、取样限制少等诸多优于其它分子标记的特点,所以从70年代发展至今己经成为分子系统学的主要方法,而目前应用的主要有以下几类方法:DNA-DNA杂交法、RFLP(限制性片断长度多态性分析)技术、DNA指纹图谱技术 (DNAfp)、RAPD(随机扩增多态性 DNA)技术、AFLP(扩增的限制性片断长度多态性)技术以及DNA序列分析技术。其中RAPD技术由于具有高效、快速、简便等特点,自建立以来,很快就得到了广泛应用。1. RAPD技术在昆虫学中的研究概述以及螽(虫斯)总科的系统学研究现状 RAPD技术是基于PCR技术的一项DNA分子多态检测技术,利用随机合成的寡聚核苷酸序列为引物(一般为10bp)分别与 DNA的两条单链结合,在 DNA聚合酶的作用下,对基因组的特定区域进行PCR扩增,其电泳结果为不同大小和数目的DNA谱带即RAPD图谱,可反应出基因组相应区域的多态性。RAPD技术可在对物种没有任何分子生物学研究的情况下,对其DNA进行多态性分析,并直接运用于分类研究和系统推测,大量的研究已表明RAPD是一种优良的遗传标记。 材料易保存、需量不大、无需分子生物学研究背景而又操作简便的RAPD技术一出现就很快被昆虫学家所认可,并且被广泛地应用于种属的分类鉴定、种下分类、系统发育等多项分子系统学研究中。但是,由于昆虫种类和数量的过于庞大,目前的研究多集中于一些与人类生产生活关系较为密切的种类如蚊、蝇、蚜虫等,其它昆虫的研究则相对较少。国内应用RAPD技术于昆虫学研究则更为滞后。 螽(虫斯)属于昆虫(Insecta)直翅目(Orthoptera)长角亚目(Endifera)螽(虫斯)总科(Tettigonioidea)。早在 2000多年前,螽(虫斯)就因其能发出动听的鸣声而引起人类的兴趣。在中国,它们甚至还成为子孙繁盛的象征。这类昆虫与农林牧业关系密切,有些种类曾造成严重危害,许多种类是重要的天敌昆虫,目前,全世界己知约900属5000种以上。我国蔬撕总科昆虫超过300种,隶属于10科80余属。传统的形态分类目前仍是荔撕系统学研究最主要的方法,近代新技术在菌撕分类上应用的主要有发音和细胞学方法,分子系统学方面的研究很少,国外如RitChie等口 997)研究报道了荔撕的 RAPD和呜声类型之变异性,国内陕西师范大学动物研究所 1998年首次将 RAPD技术运用于泰撕总科的分子系统学研究中,采用2条引物对12种泰撕总科昆虫进行了初步研究。2.研究目的 本项研究是在前人的基础上,采用多条引物,对6科28属64种蠢撕总科昆虫进行RAPD扩增,在分子水平上探讨这些种的分类地位和亲缘关系,从而丰富泰蝴总科的分子系统学研究,并为传统的形态分类提供有力的佐证。3.材料和方法3*实验材料 本项研究所用的蠢撕标本,基本上是作者于 1998—2000年赴陕西、四川、重庆、湖北、甘肃、云南、广西等地采集的,分属于6科28属64种,所有标本均保存于无水乙醇中。3.2实验方法3.2.l基因组 DNA的提取及检测 本实验所采用的基因组 DNA提取方法参考了张迎春(1998)提取瓢虫基因组 DNA的方法,对实验步骤做了部分修改。该方法的特点为:采用 2 X CTAB缓冲液;只需CI溶液(氯仿:异戊醇=24:l)抽提一次;用冰冷异丙醇沉淀DNA。 对所提取的DNA样品,本文采用两种方法来检测,即凝胶电泳检测法和紫外分光光度计检测法。凝胶电泳检测法采用浓度为 1%的琼脂糖凝胶,EB(溪化乙锭)染色。电泳后置于紫外检测仪上观察结果,如有必要,可用一次成像系统记录。使用核酸/蛋白质分析仪检测核酸样品的OD值,通过波长260urn的OD值,计算DNA样品的浓度,通过波长260urn与280urn的OD比值考量DNA样 厂且品纯度,OD260/280值在l.6至l.8间时为较纯的DNA,大于l.8,说明样品中RNA未除尽;小于1石,说明样品存在有蛋白质。3.2.2 RAPD扩增反应体系(总体积20 v帅0下表所示: 扩增反应程序为:预变性:94℃,lmill45s:变性:94℃,305:退火:37OC,lmin30s;延伸:72OC,Zmin;45个循环,循环后,在72C延伸10min。 扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检测,具体步骤与基因组DNA凝胶电泳检测类似,只是琼脂糖凝胶浓度为1.5%,结果记录同DNA样品提取部分。根据记录实验结果的照片统计原始数据,统计时只记录清晰的条带,将每一引物扩增每一样品产生的每一条带作为性状看待,当某一扩增带出现时,记作“l”,否则为“0”,统计实验结果用于聚类分析,聚类分析采用系统聚类法,利用SPSS软件包进行,建立数据文件后用 Average Linkage Between Groups法构建聚类图。4.结果分析与讨论 CTAB tZ是一种常用的基因组DNA提取方法,但一般都用来提取植物组织的基因组DNA,?
其他文献
本文从量子信息与量子计算和算子论与算子代数的关系入手,运用算子论和算子代数的方法,研究了对偶量子计算机中容许广义量子门及其实现的条件以及限制性容许广义量子门的若干性质,给出了完全正映射的一些相关结论和仿射映射所对应的矩阵表示,研究了三量子比特的Toffoli门的两种分解,在引入广义受控非门的基础上讨论了广义交换门及它们之间的关系.主要内容包括:第一章介绍了对偶量子计算机的一些基本概念,讨论了对偶模
量子力学是一套构造物理学理论的规则,而量子逻辑是1936年G. Birkhoff和J. von. Neumann提出的概念,目的是为量子力学提供数学基础,量子逻辑研从代数结构上就是正交模格(完备的复可分的无限维希尔伯特空间中的闭子空间按照包含关系形成的格就是一个正交模格).上世纪60年代随着量子逻辑研究的发展,出现了许多新的模型,如正交代数、弱正交代数等.在二十世纪90年代,斯洛伐克和意大利的学派
艺术领域课程是幼儿园教育中的重要知识内容,其包含美术、音乐、舞蹈、钢琴、手工等多种知识内容,是提升儿童审美意识与审美能力的重要途径。儿童绘本具有趣味性强、内容简单、画面夸张等特点,将其融入艺术领域课程中,能够构建全新的教学课堂,更好地激活儿童的学习兴趣,对其能力的提升有着重要的作用。因此,教师要充分意识到这两者融合的趣味性,选择合适的策略与方法,促进幼儿能力的提升,构建全新的幼儿园艺术领域课
期刊
拟黑多刺蚁(Polyrhachis vicina Roger)是一种重要的经济昆虫,在分类学上隶属于节肢动物门、昆虫纲、膜翅目、胡蜂总科、蚁科、多刺蚁属。其个体发育过程中经历胚胎期、幼虫期、蛹期、成虫期等各个阶段,且是一种社会性昆虫,群体内存在严格的品级分化。拟黑多刺蚁资源较易获得,实验室养殖较为方便,因此是一种独特的进行个体发育及分化研究的实验材料。本研究以拟黑多刺蚁为实验材料,通过RT-PCR
赋值代数是从软约束、关系数据库及信任函数等多个理论体系中抽象出来的一种应用于对非确定性信息进行局部计算的代数框架.最近的研究表明,赋值代数的很多重要的实例,包括约束系统,可能性位势,概率位势等都可以由一些特殊的半环诱导而得.本文主要围绕半环诱导的赋值代数中的优解问题、赋值代数的结构及相关结构之间的联系展开研究.在优解问题的研究中,给出了映射保投影问题的优解的条件.这为寻找合适的转移函数提供了依据.
本文主要是对算子代数上的Lie映射和Jordan映射进行研究,内容涉及三角代数上的非线性Lie导子,因子von Neumann代数上的非线性*-Lie导子,因子vonNeumann代数上的非线性保*-Lie积和保ξ-*-Lie积的双射,CSL代数上的Lie三重导子,三角代数上的Jordan(θ,φ)-导子和完全矩阵代数上的广义Jordan导子.全文共分为四章,具体内容如下:第一章首先介绍了本文选题
通过建立生物模型,利用丰富的数学理论和方法来研究生物学中的问题是现代科技发展的重要方向之一.大量的生物模型可归纳为反应扩散方程(组).利用反应扩散方程(组)来研究这些模型也是偏微分方程研究领域中的一个重要研究方向.本文基于反应扩散系统理论的研究及应用现状,在前人研究成果的基础上利用非线性分析、非线性偏微分方程,特别是反应扩散方程和对应的椭圆型方程的理论和方法,分别对两类生物模型:恒化器(chemo
黄脸油葫芦(Teleogryllus emma (Gryllusmitratus Burmeister))隶属于直翅目(Orthoptera),蟋蟀科(Gryllidae),是一种重要的资源昆虫,可用于饲料、医疗和食品领域,具有特殊的经济价值,并且由于其个体大、易于解剖,因而是研究昆虫发育及基因表达调控的良好实验材料。核受体(nuclear receptor, NR)是一类可以扩散并能与特异性配体
直翅目(Orthoptera)昆虫是不完全变态类昆虫中唯一一个最大,且研究最多的类群,全世界已知约23000种,中国已知1500余种。关于直翅目昆虫的物种鉴定主要基于外部形态特征和外生殖器结构的差异,传统的分类方法存在不足。随着分子生物学技术的发展,一些基于DNA的技术在物种鉴定工作中逐渐应用。近几年,为了满足对地球上所有生物进行快速编目的需要,有人提出可以使用一小段来自某一特定基因组区域的DNA
蚱是直翅目蝗亚目中较为原始的昆虫。人们对其分类地位长期有争议,对其内部各类群间的系统发育关系一直模糊不清。为了弄清蚱总科的系统发育关系,我们选择了线粒体DNA细胞色素b基因作为系统发育研究中的遗传标记。本项研究应用DNA序列测定技术对来自广西、云南、四川、重庆、陕西等省区(市)的4科8属22种蚱及2个蝗亚目外群的线粒体Cytb基因部分DNA序列进行了测定。结果表明:1、在获得的432bp的序列中,