论文部分内容阅读
目的:在氧化应激所致的心肌肥厚及凋亡中，c-JUN氨基末端激酶(JNK)是十分重要的调节因子，但其对心肌离子通道重构的调控机制还并不清楚。因此，本研究目的是明确大鼠心梗(MI)6-8周后c-JNK信号通路在电压门控钾通道(Kv)重构中的作用和内在调控机制。 方法:雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠购自河北医科大学实验动物中心。取体重180～200g的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠建立心肌梗死动物模型，于手术后6-8周，对大鼠腹腔注射超剂量戊巴比妥钠（100mg/kg）麻醉，摘出心脏，并使用Langendoff法通过冠状动脉进行胶原酶灌流，获得单一分离的心室肌细胞，在CO2培养箱中孵育4小时后，对心肌细胞样本进行全细胞膜片钳试验记录电压门控钾通道电流(Ito)和分子生化分析。本研究使用非放射性JNK激酶分析kit(Cell Signaling Technology)进行c-Jun活性测定。 结果: 1、使用免疫印迹法显示心梗后JNK活性显著升高约1倍，而电压门控钾通道电流(Ito)显著降低(Sham组:28.9±3.1 pA/pF，n=20;MI组:15.2±2.7pA/pF, n=15; P＜0.05); 2、心梗后心室肌细胞经JNK抑制剂SP60012510 M处理4小时后，Ito电流密度可恢复至对照组水平（SP600125+MI:31.6±3.5 pA/pF，n=11;Sham组:28.9±3.1 pA/pF，n=20;P＜0.05）;且假手术组经SP600125处理后的最大Ito电流强度(27.9±3.6 pA/pF，n=9)和未经处理的假手术组无统计学差异。心梗心肌经膜渗透性蛋白抑制剂JNKI-1（10μM）处理后，Ito密度也有显著增加，而假手术组经相同处理后无改变; 3、硫氧还蛋白(Trx)还原酶抑制剂金诺芬(AF)显著抑制了SP600125对心梗大鼠心肌Ito电流的增大作用(MI+AF+SP600125:15.7±3.3 pA/pF，n=17)，而AF对假手术组Ito无明显影响; 4、JNK抑制剂SP600125治疗后心梗心肌的Kv4.2蛋白表达量显著增大，尽管未完全回复到假手术组心肌水平，与先前在心梗心肌所观察到的Ito电流改变一致。而JNK抑制并没有明显改变假手术组心肌的Kv4.2蛋白表达量。 结论:心梗后心肌钾通道重构是氧化还原敏感的，可能通过持续性激活c-JNK信号通路促进Ito重构。本研究结果表明，在心梗心肌中，JNK活性显著增高，降低Kv通道的电流密度;抑制JNK信号通路后可显著改善Kv通道重构，这一过程可能被硫氧还原蛋白系统所调控。