本试验采用RT-PCR法以黑曲霉(Aspergillus niger)菌株总：RNA为模板克隆内切葡聚糖酶基因cDNA序列。PCR产物直接测序表明EG-B基因全长999bp，GC碱基含量为53.95％，以ATG为起始密码子，TGA为终止密码子，编码332个氨基酸组成的多肽，与参考内切葡聚糖酶Eng1基因(Genebank NO.AF331518)核苷酸同源性为98％，氨基酸同源性为99％。。氨基酸序列分析表明该内切葡聚糖酶属于糖基水解酶家族5。将该基因扩增至pMD19-T simple载体并转化至大肠杆菌JM109中，构建重组质粒CTB256-T-1和CTB256-T-2。其中CTB256-T-2 PCR扩增出的目的基因成熟编码区与PCR产物直接测序结果完全一致。 在上述试验的基础上，通过限制性内切酶EcoR I/HindⅢ完成了原核表达载体构建：将经双酶切鉴定正确的原核融合表达质粒pET-28a/EG-B在大肠杆菌BL21(DE3)中充分表达；并利用原核表达载体pET-28a上N端融合组氨酸标签，将EG-B基因表达的目的蛋白经Ni<2+>-chelating和Heparin树脂逐级分离纯化：纯化后的目的蛋白作抗原免疫家兔，制备多克隆抗体，Western blotting检测确定EG-B基因表达的重组蛋白和黑曲霉(Aspergillus niger)菌株天然蛋白具有相同的抗原显色反应。试验结果如下：(1)RT-PCR法克隆的EG-B基因与已发表黑曲霉(Aspergillus niger)编码内切葡聚糖酶Eng1基因(Genebank NO.AF331518)核苷酸同源性为98％，氨基酸同源性为99％；(2)EG-B基因表达的目的蛋白相对分子质量为36.52KDa，蛋白的等电点为4.115； (3)EG-B基因表达的目的蛋白经多级分离纯化后酶比活力为180.8U/mg；(4)EG-B基因表达的重组蛋白和黑曲霉(dspergillus niger)菌株天然蛋白具有相同的抗原显色反应。以上试验结果可以得到同一个结论，即编码黑曲霉(Aspergillus niger)菌株的内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到成功表达。