益气护卫汤对哮喘小鼠免疫状态影响的研究

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支气管哮喘(简称哮喘)是一种常见慢性疾病,严重威胁公众健康。吸入性糖皮质激素是目前哮喘治疗最有效的方法,但只注重局部抗炎治疗而不能纠正全身免疫功能紊乱状态。中医药在哮喘缓解期的免疫调节治疗有着独特的优势,通过扶正祛邪,可对全身进行免疫调节,纠正其紊乱状态,减轻或消除气道炎症,以达到预防哮喘的急性发作,甚至长期缓解的目的。益气护卫汤是由导师洪广祥教授积多年临床经验所创制的用于哮喘缓解期的有效方剂。该方主要针对哮喘反复发作的内因——气阳虚弱而设,由玉屏风散、桂枝汤、二仙汤三方化裁而来,全方药为生黄芪、防风、白术、仙茅、仙灵脾、桂枝、白芍、生姜、大枣、炙甘草,功能益气温阳,调和营卫,振奋真元。本课题通过观察益气护卫汤对哮喘机体气道局部与整体免疫紊乱状态的影响,试图从免疫学角度探讨其防治哮喘的作用机制。 本研究选用BALB/c小鼠作为哮喘动物模型,第0、7、14天腹腔注射卵蛋白(100μg)与氢氧化铝佐剂(2mg)的生理盐水溶液,致敏小鼠,第15-21天,雾化吸入2%卵蛋白激发哮喘,模拟哮喘反复发作过程,经肺泡灌洗液细胞学及肺组织的病理学观察,模型小鼠气道内存在以嗜酸性粒细胞为主的炎性细胞浸润,形成气道慢性炎症的病理特征,成功建立哮喘小鼠模型。 将48只小鼠随机分为哮喘模型组,益气护卫汤组,地塞米松组,正常对照组,每组12只。益气护卫汤组从第1天开始以益气护卫汤(预温至37℃)9ml/kg/日灌服小鼠。地塞米松组从第1天开始以地塞米松/生理盐水溶液,3mg/kg/日灌服小鼠。正常对照组则用生理盐水代替致敏和激发的不同浓度卵蛋白。最后一次激发后48h采集外周血、肺泡灌洗液(BALF)、肺组织及脾组织。 光镜下计BALF中细胞总数,瑞-姬染色细胞涂片,油镜下计数200个细胞中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、单核/巨噬细胞、中性粒细胞各占百分比;4%甲醛固定肺组织,石蜡包埋,切片,HE染色,光镜下观察支气管及肺组织炎性细胞浸润情况、支气管上皮损害及血管的充血水肿情况等病理变化;采用流式细胞仪计数小鼠外周血CD3、CD4及CD8T淋巴细胞;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清可溶性白介素-2受体(sIL-2R)水平,BALF中白细胞介素-4(IL-4)水平及γ-干扰素(IFN-γ)水平;采用异硫酸氰胍一步法提取脾细胞总RNA,检测总RNA的纯度在1.8-2.0之间,进行RNA的逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR),将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,采用生物电泳图谱分析系统软件,凝胶成像并分析IL-4mRNA及IFN-γmRNA的表达水平。采用SAS 6.12统计软件的GLM过程进行方差分析及多个均数之间的两两比较,检验水平α=0.05。 本研究结果显示:(1)益气护卫汤能有效减少气道内炎性细胞的数量及嗜酸性粒细胞所占百分比,抑制炎性细胞在支气管、血管周围及肺泡腔内的浸润,减轻气道炎症;(2)益气护卫汤能减少外周血CD4细胞比例,恢复CD4/CD8比例平衡,并有效抑制T淋巴细胞的活化;(3)益气护卫汤能降低肺泡灌洗液中IL-4水平,升2 益气护卫汤对哮喘小鼠免疫状态影响的研究高r-Y,抑制气道内* 细胞及其细胞因子的优势反应,促进气道内仆/ThZ亚群平衡;(4)益气护卫汤能抑制脾细胞IL-4基因表达,增强IFN-Y基因表达,使IL-4与IF卜Y基因表达水平比例恢复至正常,说明益气护卫汤能有效恢复整体孙亚群平衡。 本研究提示:(1隘气护卫汤不但能减轻气道局部炎症,还能增强哮喘机体免疫调节能力,纠正机体的免疫功能紊乱状态,从根本上减轻或消除引起哮喘的病理基础,以预防哮喘的反复发作;(2)益气护卫汤可能与糖皮质激素存在协同作用,联合运用两药防治哮喘,有可能取得更好的疗效。
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