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慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)是以粒系增生为主要表现的恶性克隆性疾病。CML的治疗的目的是消除症状,控制血液和遗传学异常,最大限度地延长患者生存期。CY03529是以伊马替尼(Imatinib,英文别名IMA-3,商品名为Glivec)为结构基础上设计并合成得到的抗慢性粒细胞白血病的新实体化合物,属取代四氢化萘酰胺类化合物,是伊马替尼的me-better药物。本文通过系列体外实验以证明CY03529对K562细胞具有增殖抑制作用及可诱导K562细胞凋亡,这为开发高效低毒的抗慢性粒细胞白血病药物提供依据。根据伊马替尼作用机制及靶点,选择bcr/abl激酶、c-Kit激酶、bcr/ablT315I突变体激酶作为靶点与取代四氢化萘酰胺类化合物系列化合物对接,根据打分程序进行筛选,然后将命中化合物CY03529分别与伊马替尼共有的靶标bcr/abl激酶及c-Kit激酶对接,CY03529与bcr/abl相互作用平均打分(14.597)要高于伊马替尼与bcr/abl相互作用的平均打分(8.546)；CY03529与c-Kit相互作用打分(15.077)也明显高于伊马替尼的打分(6.361); CY03529与bcr/ablT315I突变体激酶相互作用打分(13.805)也明显高于伊马替尼的打分(7.581)。利用分子对接原理寻找CY03529的适宜作用位点；采用血细胞计数法,绘制细胞的生长曲线,以考察细胞其生长增殖特性；采用MTT法、双层软琼脂克隆法、吉姆萨染色法检测CY03529对K562细胞生长抑制作用；采用AO-EB染色、流式细胞分析术、DNA断裂检测不同浓度药物作用K562细胞后的细胞周期及细胞凋亡情况；通过RT-PCR及Western blotting免疫印迹方法从基因及蛋白水平研究细胞凋亡机制；结果如下：1.分子对接结果显示,CY03529能够较好的作用在bcr/abl激酶的Site1和Site4上从而发挥作用；2.选择K562作为研究对象,测定细胞生长曲线,倍增常数在1.60d。细胞接种量及培养时间分别为2～4×104cel1/L,1～2天。体外细胞实验结果显示,MTT法对K562细胞测定结果显示,CY03529的ICso值为24.83nmol/L;时间剂量曲线的结果显示,CY03529具有浓度依赖性；3.双层软琼脂克隆实验结果显示,CY03529集落形成抑制率均大于70%；吉姆萨染色法显示,CY03529可诱导K562细胞向正常细胞分化,且具有浓度依赖性。AO-EB结果可见,随着药物浓度增加,细胞产生的凋亡小体增多,凋亡现象明显；4.流式细胞分析术检测到CY03529可将K562细胞阻滞在G1期；DNA断裂结果显示,药物作用K562细胞后,可在180～200bp的处产生条带,符合细胞凋亡的现象；Western免疫印迹法检测CY03529对P210bcr-abl蛋白表达的影响结果表明,P210bcr-abl蛋白以剂量依赖方式被下调,在中、高浓度处有明显改变。综上所述,CY03529对K562所致的慢性粒细胞白血病有很好的抗肿瘤活性和安全性,可以作为进一步研究的对象。