甘草及蜜炙甘草饮片的系统质量评价研究

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甘草来源于为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根茎,始载于《神农本草经》,被列为上品。甘草的化学成分主要包括黄酮、皂苷以及多糖等,具有补脾益气,祛痰止咳,调和诸药,缓解药物毒性的功效。现代药理学研究表明,甘草具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、神经保护、肝脏保护等药理作用。随着甘草野生资源的大量破坏,栽培甘草成为市场主流,内蒙、新疆、甘肃和宁夏等地作为甘草主要产区。目前,对甘草饮片质量的研究有很多,但仍旧存在评价指标不全面,产地差异不明确、相关炮制品质量规范不完善等问题。因此,本文收集到分别来自内蒙、新疆和甘肃3个产地的甘草饮片(23批)和炙甘草饮片(17批)进行了系统全面的质量评价。首先,以上述40批饮片为研究对象,依据中国药典(2020版)检测项对其进行质量评价,同时新增了甘草苷和甘草素作为薄层鉴别的对照点,以及热浸法下甘草的水溶性和醇溶性浸出物测定项,结果表明新增项均可作为甘草和炙甘草饮片评价的重要指标。此外,在药典中仅五种药材以多糖作为检测指标,在此基础上建立了科学稳定的甘草多糖(GP)含量测定方法。通过单因素试验和正交试验,优化并确定了最佳提取条件为液料比为400:1,提取时间为2 h,提取3次。40批样品GP含量的测定结果表明,蜜炙甘草中GP含量高于甘草。新疆地区样品中GP含量总体较高。对多糖含量进行HCA分析发现,不同产地的样品之间存在一定的交叉。采用多成分定量、指纹图谱和化学计量学方法对所有样品进行系统评价。指纹图谱结果表明,甘草和蜜炒甘草样品具有较高的对应度和相似性。甘草苷(LQ)、异甘草苷(ILQ)、甘草素(LQG)、异甘草素(ILQG)及甘草酸(GA)的多成分定量测定结果表明,甘草苷和甘草酸为主要成分,其中来自内蒙产地的甘草和甘肃的炙甘草中五成分总含量较高。总酚(TP)、总黄酮(TF)和总皂苷(TS)的测定结果表明,所有样品均含有较高的总黄酮含量。体外活性实验结果表明,来自内蒙的饮片具有良好的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制能力。与抗氧化活性相比,所有样品均表现出较高的α-葡萄糖苷酶抑制活性。将所测得的化学成分(LQ、ILQ、LQG、ILQG、GA、GPc、TPc、TFc和TSc),水溶性和醇溶性浸出物,抗氧化活性(DPPH、OH和ABTS)和α-葡萄糖苷酶抑制活性(α-Glu)设定为15个变量,采用化学计量学方法进行分析。PCA结果表明,不同产地的甘草饮片和炙甘草样品均不能达到较好的区分,样品存在不同程度的交叉。OPLS-DA分析表明,不同产地的甘草和炙甘草饮片均达到良好地区分。VIP值分析发现,α-Glu、水溶性浸出物和LQ是影响甘草分类的3个共同因素,LQ、α-Glu、TPC和TSC是炙甘草分类的4个共同因素。相关分析结果表明,甘肃产地的甘草和新疆的甘草中TFc和GPc含量较高对其抗氧化活性贡献率较高,而内蒙产地的蜜炙甘草中TPc含量较高对α-葡萄糖苷酶抑制活性相关性最强。最后通过网络药理学进一步研究甘草治疗糖尿病的潜在作用机制。以甘草苷为主要成分的39个具有良好口服生物利用度(OB)和药物相似性(DL)的化合物从甘草中筛选出来,通过Venny分析得到甘草与糖尿病的41个交集靶蛋白。以度值为依据,通过PPI网络进一步确定8个核心蛋白(AKT1、MAPK3、MAPK1、PTGS2、CASP3、PPARG和JUN)为糖尿病治疗的潜在核心靶点。对其进行GO分析和KEGG通路富集分析,结果表明糖尿病的靶蛋白主要与生物学过程(BP)和分子功能(MF)有关,甘草可能通过调节炎症因子和PI3K-Akt信号通路对糖尿病有一定的治疗作用。综上所述,本文以40批不同产地的甘草和炙甘草饮片为研究对象,综合利用HPLC和LC-MS等分析技术,PCA、OPLS-DA及网络药理学等分析方法,从定性与定量结合,成分与活性结合,有监督与无监督分类等角度对三个产地的甘草和炙甘草饮片进行了系统的质量评价研究,为甘草饮片的临床应用和产品开发提供研究基础。
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