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体内骨量的稳态维持是由促进骨生成的成骨细胞（osteoblast,OB）以及吸收骨质的破骨细胞（osteoclast,OC）共同维持的。当机体出现免疫失衡时,骨平衡也经常被破坏,比如许多自身免疫性疾病患者会出现骨质疏松的症状。OC来源于单核-巨噬细胞,除了M-CSF和RANKL这两个经典诱导分化的细胞因子之外,OC的形成还需要由Fc受体g链（Fc Rg）和DAP12的ITAM转导的共刺激信号参与。早期对于免疫系统与骨平衡关系的研究主要围绕免疫细胞释放的细胞因子,但对于免疫应答过程中所产生的抗体则研究甚少。在OC表面具有Ig G Fc受体（FcγRs）,这提示抗体或其复合物可影响OC的分化。目前对于FcγR在OC分化中作用的研究尚存争议,FcγRIIa这一独特表达于人的亚型对OC分化的研究仍是空白。因此本课题拟利用人FcγRIIa转基因（h FcγRIIa-Tg）小鼠,通过体内外实验探讨其对OC分化及骨平衡的影响。我们首先对老龄（40周龄）hFcγRIIa-Tg小鼠及野生型（WT）小鼠的骨代谢情况进行分析,Micro-CT扫描检测发现老龄h FcγRIIa-Tg小鼠骨丢失较WT小鼠明显严重,且h FcγRIIa-Tg小鼠血清中TRAP5b、Ca2+、CTX-1骨吸收代谢相关分子表达水平较WT小鼠高,提示h FcγRIIa-Tg小鼠骨质丢失增强。同时我们对两组小鼠股骨组织中的OC分化情况进行半定量分析,股骨切片TRAP染色显示:老龄h FcγRIIa-Tg小鼠股骨组织中OC数量多于WT小鼠,可能是h FcγRIIa在体内促进OC分化的结果。进一步我们通过OC体外分化的实验比较了两组小鼠来源的骨髓细胞向OC分化的能力,结果表明h FcγRIIa-Tg小鼠OC数量、面积较WT小鼠多,且骨吸收能力强。以上结果提示h FcγRIIa对OC分化有促进作用,进而导致小鼠的骨质丢失。RANKL是促OC分化的特异性细胞因子,与骨保护素（osteoprotegerin,OPG）共同维持体内骨平衡,病理情况下RANKL水平升高会导致机体出现骨丢失。我们采用腹腔注射RANKL诱导的快速骨丢失模型比较两种小鼠的骨丢失情况,结果显示,h FcγRIIa-Tg小鼠在该模型中骨丢失现象更为严重,且OC分化更多,说明hFcγRIIa在体内可通过促进MCSF/RANKL介导的OC分化加剧小鼠骨丢失。在骨髓细胞中,某些细胞亚群向OC分化较其他细胞更为有效,被称作OC前体细胞,是OC的重要来源。我们首先比较了两种小鼠骨髓细胞中OC前体细胞的比例,结果显示并无显著差异,也就是说h FcγRIIa不影响OC前体细胞的发育分化。我们检测到培养体系中存在微量IC,于是我们探讨了h FcγRIIa促OC分化作用是否依赖于配体（IC）对其的交联作用,阻断h FcγRIIa实验证明:h FcγRIIa促OC分化与体系中微量IC的存在无关。激酶Syk是h FcγRIIa下游的信号分子,通过Western Blot实验我们发现在h FcγRIIa-Tg来源的骨髓细胞中存在Syk的自激活现象,并且其抑制剂R406可以阻断h FcγRIIa促OC分化作用。Syk激活后可进一步激活PLCg-Ca2+以及PI3K-AKT-m TOR信号通路,利用相关通路抑制剂分析参与h FcγRIIa促OC分化作用的信号通路,结果显示h FcγRIIa通过PI3K-AKT-m TOR通路,进一步激活下游p70S6,参与促进OC的分化。为全面分析h FcγRIIa在OC分化中的作用,我们利用固相化特异性识别h FcγRIIa的单克隆抗体IV.3（c-IV.3）交联h FcγRIIa,考察其对OC分化的影响。结果与配体非依赖的促OC分化效应相反,其完全阻断了h FcγRIIa-Tg小鼠来源骨髓细胞向OC的分化。对c-IV.3交联后的细胞中可能阻断OC分化的分子进行分析发现,c-IV.3可诱导h FcγRIIa-Tg小鼠来源骨髓细胞表达A20,抑制NFATc1的表达,进而阻断OC进一步分化。同时对细胞形态分析发现c-IV.3交联后对h FcγRIIa-Tg小鼠来源细胞虽不能分化为OC,但其也发生细胞融合,形成一种体积较小,TRAP阴性的融合细胞,这与巨噬细胞融合形成的与抗感染相关的异物巨细胞（foreign body giant cells,FBGCs）相似,并且这一过程不依赖于RANKL和Syk激酶。对细胞融合相关分子的研究发现,c-IV.3交联后h FcγRIIa-Tg小鼠来源细胞可瞬时表达DC-STAMP,并随时间推移下降至基线。c-Abl是FcγRIIa下游除Syk外的另一种激酶,可激活特异性的STATs成员。结果表明h FcγRIIa交联后细胞c-Abl显著激活,并且激活了STAT1,STAT3,STAT5及STAT6,抑制STAT5可以阻断交联h FcγRIIa导致的巨噬细胞融合,表明交联h FcγRIIa激活c-Abl-STAT5通路,进而促进小融合巨噬细胞的形成。综上,在h FcγRIIa未被交联仅激活下游Syk激酶时,通过Syk-m TOR通路参与促进OC分化。与此相反,当h FcγRIIa交联后通过上调A20抑制OC分化,同时可激活c-Abl激酶,并通过c-Abl-STAT5通路促进小融合巨噬细胞形成。我们的研究阐明了h FcγRIIa在不同情况下对OC分化有不同的效应,对FcγR与OC的关系进行了补充,为临床治疗免疫相关的骨质疏松提供了理论基础。