Beclin-1、P62、LC3B在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达变化

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目的:探讨自噬相关蛋白Beclin-1、P62及LC3B在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达及意义。方法:生长至对数生长期的S.pn标准株D39用无菌PBS调节浓度为1.5×10~9CFU/ml,采用鼻滴的方法对50只SPF级雌性Balb/c鼠(6~8周,16~20 g)进行处理,分别在感染后0、6、12、24、48h收集Balb/c小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及肺组织,瑞氏-吉姆萨染色进行BALF细胞计数,HE染色观察肺组织病理学改变,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、P62、LC3B在肺组织中的表达水平,免疫荧光观察LC3B在肺组织中的表达情况。结果:HE染色显示,小鼠鼻饲S.pn后12h及24h后肺组织内出现大量炎症细胞浸润。BALF中总细胞数量及中性粒细胞数量于感染后6h开始增高(1.280±0.506、6.272±1.312,P=0.000;0.000±0.000、3.456±1.308,P=0.000),在12h时达到高峰(1.280±0.506、19.456±0.997,P=0.000;0.000±0.000、15.040±1.012,P=0.000),48h后基本恢复正常水平(1.280±0.506、3.520±0.933,P=0.005;0.000±0.000、0.128±0.175,P=0.835)。Western blot结果显示:自噬相关蛋白Beclin-1于感染后6h开始增加(0.626±0.078、0.921±0.093,P=0.002),48h时达到最高水平(0.626±0.078、1.884±0.158,P=0.000);自噬相关蛋白P62于感染后6h开始减少(2.915±0.094、2.275±0.269,P=0.000),48h时降低至最低水平(2.915±0.094、1.178±0.142,P=0.000);自噬相关蛋白LC3B于感染后12h开始升高(0.747±0.197、1.429±0.318,P=0.006),24h时达到高峰(0.747±0.197、2.002±0.451,P=0.000),48h后降低(0.747±0.197、1.563±0.501,P=0.002)。免疫荧光显示:小鼠感染后12h与24h,肺组织中LC3B蛋白表达水平增加。结论:S.pn感染小鼠肺部后激活自噬的发生,且自噬在免疫调节过程中发挥着重要作用。
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