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目的通过建立急性早幼粒细胞白血病动物模型,考察ATO联合ART对急性早幼粒细胞白血病的治疗作用。以人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4为研究对象,考察三氧化二砷联合青蒿琥酯对NB4细胞生长抑制、周期分布、凋亡情况及相关蛋白的表达情况,以探讨其作用机制。方法1.急性早幼粒细胞白血病动物模型的建立FVB小鼠,雄性,6-8周龄,检疫适应三天,分为两组,一组尾静脉注射携带PML-RARα及GFP基因的小鼠脾细胞造模,另一组作为正常对照组不作处理。观察小鼠一般生存情况;流式细胞仪检测外周血GFP比例;取主要组织做病理切片检查;取脾细胞提RNA做PCR分析目的基因表达情况。2.基于FVB小鼠模型考察三氧化二砷联合青蒿琥酯对APL的药效学情况建模:FVB小鼠尾静脉注射瘤细胞建模。分组:将建模后小鼠随机分为组,分别是正常对照组、模型组、ATO组、RA组、ART组、ATO+RA组、ATO+ART组、RA+ART组、ATO+RA+ART组。分批实验,主要考察小鼠生存时间、外周血GFP阳性率、骨髓细胞表面抗原CD34/CD117阳性率、主要脏器病理检查。3.三氧化二砷联合青蒿琥酯对NB4细胞增殖的抑制作用MTT法检测不同剂量的三氧化二砷、青蒿玻酯及二者联用作用于NB4细胞后,对其增殖情况的影响并计算半数抑制浓度。4.三氧化二砷联合青蒿琥酯对NB4细胞增殖周期及凋亡的影响以NB4细胞为研究对象,给予三氧化二砷、青蒿琥酯及二者联用刺激后,流式细胞仪检测细胞增殖周期分布及凋亡情况。5.三氧化二砷联合青蒿琥酯对NB4细胞相关蛋白的影响以NB4细胞为研究对象,给予三氧化二砷、青蒿琥酯及二者联用刺激后,Western-Bolt 分析 NF-κB、VEGF、Survivin、MMP-9 四种蛋白的表达。结果1.急性早幼粒细胞白血病动物模型获得成功建立小鼠接种后15天外周血可检测到GFP,22天左右小鼠开始出现精神倦怠,活动减少,背部毛发乱杂竖起,进食减少,大便糖稀并开始出现死亡,死亡小鼠多口鼻流血,符合急性早幼粒细胞白血病临床出血症状,病理检查显示小鼠各重要脏器出现不同程度损伤,PCR检测到致病基因的表达。2.基于FVB小鼠模型考察三氧化二砷联合青蒿琥酯对APL的药效学情况小鼠给予三氧化二砷及青蒿琥酯治疗后,生存时间得到明显延长(P<0.05),外周血GFP明显下降(P<0.05),骨髓细胞分化较模型组明显改善(P<0.05),病理检查显示给药组主要脏器损伤明显改善。3.三氧化二砷联合青蒿琥酯对NB4细胞增殖的抑制作用三氧化二砷、青蒿琥酯单用有明显抑制NB4细胞增殖的作用并呈浓度依赖性,联用后较各自单用效果更加明显(P<0.05)。4.三氧化二砷联合青蒿琥酯对NB4细胞增殖周期及凋亡的影响三氧化二砷单用、青蒿琥酯单用均有明显阻滞NB4细胞增殖周期及诱导细胞凋亡的作用(P<0.05),二者合用较各自单用效果更加明显(P<0.05)。5.三氧化二砷联合青蒿琥酯对NB4细胞相关蛋白的影响三氧化二砷联合青蒿琥酯对NB4细胞内NF-κB、VEGF、Survivin、MMP-9四种蛋白表达具有不同程度的下调作用。结论1.FVB小鼠尾静脉注射携带基因的小鼠脾细胞可成功建立急性早幼粒细胞白血病模型,该模型为目前国内外研究急性早幼粒细胞白血病发生发展及治疗的常用模型。2.青蒿琥酯可增强三氧化二砷及维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病的治疗作用,延缓疾病进程,有效延长生存时间,为临床新的用药方式提供了实验依据。3.青蒿琥酯单用有明显抑制NB4细胞增殖的作用并呈浓度依赖性,用三氧化二砷合用较各自单用效果更加明显。4.阻滞细胞增殖周期及诱导细胞凋亡是三氧化二砷单用和联合青蒿琥酯抑制NB4细胞增殖可能作用机制之一。5.抑制肿瘤增殖及转移相关蛋白的表达可能是三氧化二砷联合青蒿琥酯改善急性早幼粒细胞白血病的作用机制之一。