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铜是生命体所需的微量元素之一,它在动物体内发挥多种生理功能,它参与包括血红蛋白形成,药物代谢,碳水化合物代谢、儿茶酚胺生物合成以及抗氧化剂的防御机制等过程,因此,对于机体的铜稳态以及在动物体内铜代谢平衡中,铜的摄取及转运均发挥至关重要的作用。生命体对铜的摄取,吸收,转运以及排泄的过程非常复杂,并且受摄入日粮中铜水平的影响。本试验以绵羊、山羊为试验动物,以日粮中添加不同水平的铜,观测绵羊、山羊血液中铜相关指标,肾铜及尿铜含量,肾脏相关铜转运蛋白mRNA的相对表达量及肾脏铜相关转运蛋白的表达量,以探究不同铜水平对绵羊、山羊肾脏的影响,探索铜在绵羊、山羊肾脏铜转运的过程,为绵羊、山羊肾脏铜转运代谢机制提供理论依据。1.试验一:日粮中铜水平对绵羊的血液中酶活性指标和铜转运因子mRNA相对表达量及其蛋白表达量的影响本试验采用完全随机化设计,将15只绵羊随机分成三组,每个分组五个重复,每个重复一只羊。各分组为sCu0组(基础日粮组),sCu10组(基础日粮中加入10 mg/kg·DM五水硫酸铜),sCu25组(基础日粮中加入25 mg/kg·DM五水硫酸铜)。试验期为60天,采集第60天绵羊血清和肾脏组织,尿液样品。检测血清中的铜含量,铜蓝蛋白酶活性及与铜转运相关的酶活性,肾脏铜转运蛋白mRNA相对表达量及其蛋白表达量的影响。相关试验结果如下:绵羊血清中CP、ALP、CuZn-SOD的活性与日粮铜水平的添加量呈正相关,且差异性显著(P<0.05)。血清中的铜含量差异不显著(P>0.05),肾脏及尿液中铜含量随着日粮中铜水平的添加量增加,呈上升趋势,sCu25组肾脏及尿液铜含量显著高于其他两组(P<0.05)。sCu10组的CTR1 mRNA相对表达量及蛋白的表达量随着日粮铜水平的添加呈现先上升后下降的趋势,且显著高于sCu0、sCu25组,ATP7B及MT mRNA相对表达量及蛋白的表达量与日粮铜水平呈现正相关趋势,sCu25显著高于sCu0(P<0.05),说明在本试验中日粮铜添加量为10 mg/kg有助于绵羊肾脏的铜转运,日粮中铜添加量为25mg/kg抑制了绵羊肾脏铜转运。2试验二:日粮中铜水平对山羊的血液酶活性指标和铜转运因子mRNA相对表达量及其蛋白表达量的影响本试验采用完全随机化设计,将15只山羊随机分成三组,每个分组五个重复,每个重复一只羊。各分组为gCu0组(基础日粮组),gCu25组(基础日粮中加入25 mg/kg·DM五水硫酸铜),gCu100组(基础日粮中加入100 mg/kg·DM五水硫酸铜)。试验期为60天,采集第60天山羊血清和肾脏组织,尿液样品。检测血清中的铜含量,铜蓝蛋白酶活性及与铜转运相关的酶活性,肾脏铜转运蛋白mRNA表达量及其蛋白表达量的影响。相关试验结果如下:山羊血清中CP的活性随日粮铜水平的添加呈现先升后降的趋势,gCu100组ALP、CuZn-SOD的活性与日粮铜水平呈正相关,显著高于其他两组(P<0.05)。血清中铜含量,肾脏及尿液中铜含量随着日粮中铜水平的添加升高呈上升趋势,gCu100组肾脏及尿液铜含量显著高于其他两组(P<0.05)。gCu25组的CTR1 mRNA相对表达量及蛋白的表达量随着日粮铜水平的添加呈现先上升后下降的趋势,且显著高于gCu0、gCu100组,ATP7B及MT mRNA相对表达量及蛋白的表达量与日粮铜水平呈现正相关趋势,gCu100组显著高于gCu0组(P<0.05),说明在本试验中添加的25 mg/kg的铜有助于山羊肾脏铜的转运,日粮中铜添加量为100 mg/kg抑制了山羊肾脏铜转运。3试验三:日粮中铜水平对绵羊、山羊血液酶活性指标铜转运因子mRNA相对表达量及其蛋白表达量的比较研究sCu25组的血清ALP活性显著高于gCu25组(P<0.05),sCu25组的血清CP活性显著低于gCu25组(P<0.05)。sCu25组中肾脏、尿液中铜含量显著高于gCu25组(P<0.05)。gCu25组肾脏CTR1 mRNA相对表达量及蛋白的表达量显著高于sCu25组(P<0.05),gCu25组肾脏中ATP7B、MT mRNA相对表达量及蛋白的表达量显著低于sCu25组(P<0.05)。综上所述:日粮中添加10、25 mg/kg·DM硫酸铜分别对绵羊、山羊肾脏功能及铜转运有促进作用。日粮中添加25、100 mg/kg·DM硫酸铜分别对绵羊、山羊肾脏功能及铜转运有抑制作用,此添加量不利于肾脏铜的吸收转运。