目的:1.验证TRAIL在脑死亡大鼠肝脏中的表达情况。2.通过加入重组TRAIL,在细胞水平验证TRAIL对肝细胞的损伤作用,并初步探讨其发生可能的分子机制。方法:1.利用球囊加压法建立SD大鼠脑死亡模型,通过免疫组织化学染色、荧光定量PCR、western blot等方法检测脑死亡大鼠肝脏中TRAIL的定位、表达情况。2.将LO2细胞系分为对照组和重组TRAIL干预组,利用饥饿+缺氧/复氧法建立细胞应激模型,通过CCK-8、荧光定量PCR、western blot等方法,检测肝脏细胞损伤、凋亡相关指标,在细胞水平验证TRAIL对肝细胞的损伤作用。结果:1.动物实验:从免疫组织化学染色的结果可以发现,脑死亡状态下大鼠肝脏组织有大量炎性细胞浸润,TRAIL理想着色,在脑死亡大鼠肝脏中的表达较强,阳性多分布在血管周围,脑死亡大鼠肝脏的TRAIL表达在1H后短暂升高,之后总体呈下降趋势;western blot结果显示:TRAIL在脑死亡1H短暂升高,之后总体呈下降趋势;荧光定量PCR结果显示:TRAIL mRNA表达水平在脑死亡1H短暂升高,之后总体呈下降趋势。与脑死亡1H相比,脑死亡4H,6H的TRAIL在mRNA水平上明显降低(P<0.05)2.细胞实验:CCK8结果显示:无论常氧还是缺氧复氧,外源性添加rTRAIL不同的浓度、培养不同的时间点对LO2细胞均有损伤作用,rTRAIL对细胞的损伤作用在0.5ng/ml-1ng/ml达到最强,即使再增大浓度,细胞损伤也不再明显增加。故选取0.5ng/ml和1ng/ml两个浓度提取蛋白和RNA,western blot结果显示:随着rTRAIL浓度的加大和培养时间延长,BAX的表达量上调,BCL2的表达下调;荧光定量PCR结果显示:与不加药组相比,加入rTRAIL1ng/ml组TNFSF10C、TNFSF10D、TNFSF11B、BCL2 在 mRNA 水平均显著下调,FADD、Caspase8、Caspase3、BAX 在 mRNA水平均显著上调结论:1.TRAIL在脑死亡1H后短暂升高。2.TRAIL对肝细胞有损伤作用,TRAIL通过结合保护性受体使保护性受体在mRNA水平上降低,并通过细胞凋亡通路使细胞凋亡增加。