猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)引起的猪支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae of Swine,MPS)或称猪喘气病是一种接触性慢性呼吸道传染病,主要症状为久咳、生长迟缓,死亡率较低但发病率很高。Mhp是通过与猪呼吸道纤毛上皮细胞的紧密结合,而不是通过组织侵入机体的。它通过黏附感染猪支气管纤毛上皮细胞,使纤毛发生萎缩或脱落,继而产生后续的致病作用。目前实验室常用检测方法为PCR检测抗原和ELISA检测抗体,只能确定是否感染Mhp,不能对其进行定位。原位杂交技术(in situ hybridzation histochemistry, ISHH)作为目前最为有效的分子病理学、分子遗传学技术之一其最大的优点是：能在细胞或组织中明确检出特异DNA或RNA,并显示其状态及形态特征。本试验根据GenBank中登录的猪肺炎支原体P36基因序列,设计与合成了一条25bp地高辛标记的DNA寡核苷酸探针。采用实验室已建立的斑点杂交法对探针特异性进行实验,对Mhp168株、J株、济南株、232株都有阳性反应,不能与鸡毒支原体反应,表明P36探针有较强的特异性用地高辛标记的P36寡核苷酸探针,对猪呼吸道组织切片进行原位杂交,选定阴阳性组织,对原位杂交各项条件优化,确定胃蛋白酶消化20min、探针浓度1μg/mL、显色时间3h,初步建立了猪肺炎支原体原位杂交检测法。使用建立的原位杂交检测方法分别对经猪支原体肺炎活疫苗气雾免疫后不同时期：2周、4周、6周、8周以及经强毒攻击后的猪呼吸道组织进行检测,观察动物机体内疫苗株免疫后的动态情况以及野毒感染后的分布情况。了解动物免疫和感染后体内猪肺炎支原体疫苗株及野毒株的动态分布及定位,对研究Mhp的致病机理和疫苗株的作用机制有重要意义。