基于肠道菌群-肠-肝轴高粱乌米改善DSS诱导结肠炎症的作用研究

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炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)是一种以免疫失调和胃肠道炎症为特征的特发性疾病,肝胆系统炎症也是结肠炎常见的肠外表现,目前因治疗方法均具有副作用,仍需寻找替代的治疗方法。肠道菌群紊乱、内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)易位和炎症因子的失衡等均通过肠-肝轴参与结肠炎及肝脏炎症的发生发展。多糖和膳食纤维等一类不易消化食物的摄入,可选择性地促进有益菌的生长,对结肠炎产生积极影响。因此肠道菌群-肠-肝轴可作为一种预防和治疗IBD的新靶点。高粱乌米(Sporisorium reilianum)含有丰富的多糖、膳食纤维和氨基酸等活性成分。研究发现多糖具有良好的调节肠道菌群和免疫等功效,且复合活性成分的膳食组分和全营养食品具有更好的健康协同作用。课题组前期对高粱乌米全粉(Whole Powder of S.reilianum,SRPW)和多糖(Polysaccharide of S.reilianum,SRPS)的调节肠道健康以及抗氧化活性进行了初步的探究。因此本研究基于“肠道菌群-肠-肝轴”途径,通过SRPW和SRPS干预结肠炎小鼠,探究高粱乌米调节结肠炎症的作用。采用葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导雌性Balb/c小鼠溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)模型。通过观察小鼠状态,记录饮食量、粪便p H、结肠长度以及脏器重量等,计算疾病活动指数(Disease Activity Index,DAI),通过苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,H&E)染色观察结肠和肝脏组织形态学变化。结果发现:1~7天,SRPW提高小鼠饮食量并降低小鼠粪便p H值。SRPW和SRPS缓解了小鼠因结肠炎症导致的体重和饮食量的下降和结肠长度的缩短,显著降低结肠炎小鼠的DAI和脏器指数(p<0.05),并显著改善结肠和肝脏组织损伤。表明高粱乌米具有预防结肠炎症损伤,保护肠道和肝脏的功效,长期食用可能会促进食欲和肠道蠕动,降低肠道p H值,调节肠道健康。通过16s rRNA测序,探究了SRPW和SRPS干预后,结肠炎小鼠肠道菌群的变化。结果表明,SRPW和SRPS改善了结肠炎小鼠的肠道菌群紊乱,增加菌群多样性。其中门水平Bacteroidetes、TM7和Proteobacteria等的丰度和属水平Bacteroides、Coprobacillus、Streptococcus和Lactobacillus等的丰度均趋于正常。表明高粱乌米可以通过改变肠道菌群结构和有益菌的丰度来改善结肠炎症。此外,SRPW中多种成分起到协同作用,SRPW的改善效果略优于SRPS。采用qRT-PCR和Western Blot法探究了SRPW和SRPS对结肠炎小鼠结肠组织的影响。SRPW和SRPS显著抑制了TNF-α、IL-1β、IL-6和i NOS等炎性因子、CXCL-2趋化因子、以及COX-2和MUC-2等肠粘膜因子的表达(p<0.05),显著调节了NF-κB信号通路相关因子NF-κB p65、My D88、IκBα和TLR-4等的表达(p<0.05),趋于正常水平。通过冗余分析(Redundancy Analysis,RDA),SRPW和SRPS组中丰度较高的有益菌群与炎性因子、肠粘膜因子和NF-κB信号通路中相关因子的表达呈负相关,确定了肠道菌群与结肠组织相关因子的相关性。表明高粱乌米可以通过抑制NF-κB信号通路,调控相关细胞因子的表达,同时调节肠道菌群结构,改善结肠炎症损伤。基于肠-肝轴,通过ELISA法测定了结肠、血清以及肝脏中LPS的含量变化,发现结肠炎小鼠中大量LPS从结肠易位至肝脏中,对肝脏造成了损伤。采用q RT-PCR和Western Blot法探究了SRPW和SRPS对结肠炎小鼠肝脏炎性损伤的调节作用。结果发现SRPW和SRPS均可显著下调肝脏中TNF-α、IL-1β、IL-6和i NOS等炎性因子和CXCL-2趋化因子的表达(p<0.05);调节了NF-κB信号通路NF-κB p65、My D88、IκBα、SIGIRR和TLR-4等相关因子的表达(p<0.05),趋于正常水平。表明高粱乌米可通过肠-肝轴调节NF-κB信号通路和相关细胞因子,改善肝脏炎性损伤。以上结果表明:高粱乌米可基于肠道菌群-肠-肝轴,通过调节肠道菌群结构,抑制结肠和肝脏组织NF-κB信号通路,调节相关细胞因子的表达,发挥改善小鼠结肠炎症的作用。本研究不仅为更深入的的研究提供了参考依据,同时为预防和改善结肠炎症提供了一种可能的膳食疗法,以期促进高粱乌米在功能性食品和特殊医学用途食品的应用。
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