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细胞由于其内部肌动球蛋白的相互作用,以及肌动蛋白自身的聚合作用会产生机械力,并通过黏着斑传递至胞外基质,这种力即为细胞牵引力(Cell Traction Force)。它主要受到α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin, α-SMA)与可溶性生长因子(如Transforming Growth Factor-β, TGF-β)的调节。细胞牵引力参与很多重要的生理过程,如在细胞移动过程中起着促进作用,在细胞与外界环境互作时感受胞外基质环境,在细胞基本生理形态与生理特性的维持中也起着重要作用。这些生理过程,与细胞的发育、分化、病变及衰亡进程密切相关。因此,细胞牵引力在细胞力学领域是考量细胞物理特性的一个重要参数,加快对其的深入研究,能够加深人们对细胞力学特性的理解,同时也有助于人们更全面、深入地认识细胞生长发育的机理。本试验通过对比小鼠肝细胞癌变前后细胞牵引力的变化,研究细胞牵引力在肝细胞癌变前后的变化规律,试图发现细胞牵引力与癌变之间的相互关系,阐明其影响机制。目的:通过测量、对比小鼠肝正常细胞与肝肿瘤细胞在微丝骨架、α-SMA以及细胞牵引力的变化,探明小鼠肝肿瘤细胞在各部分的变化规律,对小鼠肝肿瘤细胞的生物力学特性做更全面、深入的了解和认识。方法和结论:1小鼠肝正常细胞与肝肿瘤细胞的获取与培养。采用消化法获取小鼠肝细胞与小鼠肝肿瘤。待多数细胞形成较好的集落时,制成细胞爬片或重悬备用。2.鬼笔环肽对微丝的特异性染色。利用鬼笔环肽与微丝之间的特异性作用,对胞内微丝进行染色,以比较小鼠肝正常细胞与肝肿瘤细胞内微丝分布特征的变化。结果显示:与肝正常细胞相比,小鼠肝肿瘤细胞内微丝分布无序,结构散乱,说明细胞癌变后,细胞骨架结构发生变化,并与肿瘤细胞的生理特性相适应。3.显微镜追踪法(Cell Traction Force Microscopy, CTFM)测定细胞牵引力。选用CTFM法测定两种细胞的细胞投影面积、均方根牵引力、最大牵引力等值,并对所得结果进行统计分析。结果显示,小鼠肝肿瘤细胞较肝正常细胞其牵引力明显减小,约减小53%左右,细胞投影面积约降低15%,表明细胞牵引力与癌变过程紧密相关。4.应用免疫荧光技术以及蛋白质印迹法测定小鼠肝正常细胞与肝肿瘤细胞内α-SMA的表达量,标定α-SMA在单细胞水平与总体水平上的表达强度。结果显示:小鼠肝肿瘤细胞相较肝正常细胞,其内部α-SMA的表达量有着明显的下降趋势,在单细胞水平上约降低52%;在总体水平上降低约47%。说明α-SMA的表达水平与细胞癌变相关,并能够影响细胞牵引力水平。