利用矮化砧木是实现苹果矮化密植栽培的重要手段，也是苹果栽培发展的必然趋势。苹果矮化砧果苗具有早果、丰产、优质、高效等优点，因此国内外学者对矮化砧木的育种十分重视，并已选育出大批具有不同优良性状的矮化砧木。但这些矮化砧木也存在着自身的缺陷，利用离体叶片再生技术是改良砧木的有效途径，具有极为重要的意义。 本研究以苹果矮化砧木P59和SH40为试材，对影响叶片再生的主要因素即激素种类及配比、叶外植体的选择及处理、培养条件、叶片极性、成熟度等多方面进行研究，以期建立P59和SH40高效、稳定的叶片再生体系，从而为其遗传改良奠定基础，同时对不定芽再生过程中内源多胺和激素的变化进行研究，以期为叶片再生不定芽的调控提供理论依据。主要研究结果如下： 1、不同产地琼脂及浓度对试管苗的生长状态有很大的影响。研究发现，使用青岛琼脂时，试管苗生长粗壮，茎叶形态正常，叶色浓绿，叶片较老。使用广东琼脂时，部分试管苗茎叶畸形，叶片嫩绿，玻璃化现象严重，提高琼脂浓度，可显著减少玻璃化现象。使用广东与青岛琼脂组合时，在广东琼脂不高于5.0g/L的情况下，试管苗生长粗壮，茎叶形态正常，叶色嫩绿，无玻璃化现象。综合株高、节间长度和顶部叶片数各指标及试管苗生长情况考虑，使用广东琼脂4.0g/L+青岛琼脂2.0g/L组合，试管苗生长状态最好。 2、不同植物生长调节剂对叶片再生影响很大。研究发现，细胞分裂素BA和TDZ均可显著提高P59和SH40叶片再生率，但用TDZ再生效果最好，其效率比BA高出许多倍。TDZ诱导P59和SH40离体叶片分化不定芽的最佳浓度分别为2.0mg/L、8.0mg/L，再生率可分别达到85.62﹪、74.52﹪。生长素NAA对诱导叶片再生不定芽是必需的，在只含细胞分裂素不含生长素的再生培养基中，P59叶片不能再生不定芽，加入一定浓度的生长素NAA后，叶片却有了一定的再生能力。NAA最适宜的浓度为0.1mg/L。 3、暗培养对叶片再生不定芽是必要的。研究发现，叶片接种后完全光照培养不能再生不定芽，经过暗培养处理可显著提高叶片再生率，但暗培养时间过长会抑制不定芽的再生，最适宜的暗培养时间为20d。 4、试管苗的苗龄对叶片再生有一定的影响。研究发现，苗龄过小，叶片发育不成熟，叶片面积很小，再生率低；苗龄过老，叶片衰老，再生能力下降，最适宜的苗龄时间为25～30d。 5、同一叶片不同部位的再生能力有很大差异。研究发现，叶片基部再生能力最强，其次为叶片中部，叶片顶部的再生能力最差。 6、操作方式对叶片再生不定芽有很大的影响。研究发现，切割明显促进叶片再生，叶片正放再生效率优于反放。 7、不同的添加物对叶片再生影响不同。研究发现，在一定浓度的细胞分裂素范围内，CH可显著提高叶片再生率；AgN03抑制不定芽的再生，使用AgNO3后再生率显著下降。 8、离体叶片不定芽诱导与内源多胺含量密切相关。叶片再生过程前期(0～10d)，多胺(Put、Spm、Spd)含量处于较高水平，暗培养条件下的多胺含量显著高于光培养下的含量，并且光、暗培养条件下的多胺含量相差很大。叶片再生过程后期(20～35d)，多胺含量处于较低水平，光、暗培养条件下的多胺含量相差很小。同时发现，Put和Spm含量均在培养第10d时达到峰值，而Spd含量、多胺总量和Spd/Put、Spd/Spm、Spd/Spd+Put+Spm比值均在培养第5d时达到峰值。说明不定芽的诱导与高水平的内源多胺含量有密切关系。 9、离体叶片不定芽的诱导与内源激素含量及平衡密切相关。研究发现，叶片再生过程前期(0～10d)，激素(ZR、ABA、IAA、GA3)含量处于较高的水平，暗培养条件下的激素含量显著高于光培养下的含量。在暗培养条件下不定芽诱导过程中，ZR、ABA含量及ZR/IAA、ABA/IAA比值表现为先升后降的趋势，IAA和GA3含量呈下降趋势。说明不定芽的诱导需要较高水平的ZR、ABA含量及一定浓度的IAA和GA3含量，较大的ZR/IAA和ABA/IAA比值与不定芽的诱导密切相关。