论文部分内容阅读
试管植物的玻璃化，是指试管苗外观形态呈半透明状的生长异常现象。一旦形成玻璃化苗，植株的增殖系数即明显下降，既不能再用于后续的生根或继代增殖培养，移栽也难以成活。因此，玻璃化是试管苗生产中亟待解决的一个问题。本试验以满天星试管正常苗和玻璃化苗为材料，通过对生理生化特性、酯酶同工酶、过氧化物同工酶和RAPD指纹图谱等方面进行了研究，探讨了满天星试管正常苗和玻璃化苗的差异，为进一步研究满天星试管苗玻璃化发生机理提供基础数据和理论依据。主要研究结果如下：玻璃化苗组织含水量较高，为95.8％，而正常苗为91.7％，显著高于正常苗。玻璃化苗的各种叶绿素含量及可溶性糖和还原糖含量分别为正常苗的14.0％，63.8％和86.9％，显著低于正常苗；而玻璃化苗的过氧化物酶（POD）活性增加，是正常苗的3倍多。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对酯酶同工酶和过氧化物同工酶进行了分析，结果玻璃化苗的酯酶同工酶电泳谱带出现缺失的异常现象，同时其谱带颜色较浅；玻璃化苗的过氧化物酶活性明显高于正常苗，与过氧化物酶活性测定的结果一致，且玻璃化苗过氧化物酶的谱带数也明显多于正常苗，这种酶谱反映了玻璃化苗和正常苗的碱性过氧化物同工酶谱带和酶活性上的差异。以CTAB法提取正常苗和玻璃化苗的基因组DNA，经过检验，适合RAPD分析的需要。建立了满天星适宜的RAPD反应体系：总反应体积为25μl，其中包括14.17μlddH2O，150μmol／L dNTP，1.5 mmol／L MgCl2，2.5μl Buffer，0.3μmol／L引物，10 ng DNA模板，1U Taq DNA聚合酶。反应程序为：94℃预变性5 min，94℃变性1 min，36℃退火1 min，72℃延伸1.5 min；45个循环；最后72℃延伸7 min。RAPD结合BSA（分离群体分组分析法），用100个随机引物对满天星试管正常苗和玻璃化苗的两个基因池进行RAPD指纹图谱分析，发现有7个随机引物扩增出了多态性的差异谱带。再用上述7条引物分别对满天星试管苗及其玻璃化苗个体进行DNA的PCR扩增的结果显示，引物OPG17在2种苗中出现差异带，将这个特异带标记为OPG17-1455。并经过克隆、测序、重新设计两对引物将OPG17-1455标记转化为SCAR标记，该SCAR标记只有在玻璃苗个体中出现。