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研究背景:面部凹陷萎缩畸形是由先天性、感染性、创伤性及医源损伤性等多方面因素引起的以面部软组织缺失、凹陷、萎缩为主要特征的畸形,由瘢痕形成所导致的面部凹陷及萎缩畸形在临床上较常见。瘢痕所致的皮肤色素沉着、减退、缺失,质地改变[1],严重影响患者外观及功能。针对其治疗的方法各不相同,目前常见的方法主要包括物理磨削、激光治疗、软组织移植填充、填充剂注射和手术矫正等[1],通过上述治疗可在一定程度上改善面部畸形的情况,但没法从根本上改善瘢痕质地,治疗后可能出现色素沉着、瘢痕挛缩粘连、异物排斥、炎症等不良反应。自脂肪移植技术发明后,因其来源丰富、操作简便、填充效果满意、组织相容性好等[2]特点,被广泛应用于面部年轻化、瘢痕治疗、乳房重建等[3-5]。近年来随着自体脂肪移植技术的研究不断深入,各种提升脂肪存活率的改良技术层出不穷,使其在各个领域的治疗飞速发展,细胞辅助脂肪移植(Cell-assisted lipotransfer,CAL)技术[6]的提出,则更进一步的将脂肪移植技术推进了干细胞时代。其理论核心是通过物理或化学等方式获取脂肪的血管基质及各类细胞成分,尤其是ADSCs,然后通过进一步纯化浓缩后与颗粒脂肪混合后移植,利用其生理机制和生化特性来提高脂肪移植术后的治疗效果,以实现自体脂肪能更加高效的利用,同时还能减少并发症的发生。纳米脂肪则是通过机械乳化的方式破坏脂肪组织中成熟的大颗粒脂肪细胞,以浓缩获取其中ADSCs的方法,是一种较为新颖的实现CAL技术的重要方法。本文搜集我院2012年1月至2018年4月行传统自体脂肪移植及纳米脂肪(Nanofat)辅助脂肪移植治疗瘢痕性面部凹陷及萎缩的病例进行研究,并建立动物模型模拟病理发生情况,以获取CAL技术治疗的结果。目的:本研究通过临床观察研究和动物模型模拟实验,通过与传统脂肪移植技术治疗瘢痕性面部凹陷及萎缩治疗后近期和远期疗效的对比,探究评价纳米脂肪辅助自体颗粒脂肪移植技术(CAL)在瘢痕性面部凹陷及萎缩治疗中的优势和干细胞在治疗过程中所发生的作用,同时更进一步的对其作用机制进行初步研究。方法:1、临床研究:回顾自2012年1月至2018年4月陆军军医大学第一附属医院整形外科进行面部脂肪移植患者105例(传统组54例,CAL组51例),对患者术后3、6月满意度随访、图像资料及二次手术率进行对比,并统计分析。2、动物实验:体外培养大鼠ADSCs,稳定传代后鉴定性质,备用。将18只4周龄雄性SD大鼠随机平均分为ADSCs移植组、模型组及对照组,每组给予相应的药物处理以建立对照模型。连续处理28天后取大鼠新鲜皮肤组织用石蜡包埋制成切片,用于免疫组化和病理组织学观察。结果:1、所有患者面部凹陷及萎缩治疗后均较前改善。CAL组患者术后未出现术区积液、血肿、脂肪坏死等并发症,电镜下脂肪细胞饱满度和微血管再生情况优于传统组,CAL组患者术后6月患者满意度(满意78.43%、一般13.73%、不满意7.84%)高于传统组的满意度(满意55.56%、一般24.07%、不满意20.37%)(P<0.05),同时CAL组二次手术率(7.84%)低于传统组(22.22%)(P<0.05),统计结果均具有统计学意义。2、离体细胞培养获得可稳定传代细胞,细胞形态学、免疫荧光染色清晰显示培养所得的细胞形态特征,通过流式细胞学鉴定,传代细胞表达ADSCs常见免疫标志物CD29、CD44,诱导分化实验证明实验细胞经传代培养后仍然保留有多向分化潜力。3、Masson’s Trichome染色可见ADSCs移植组真皮胶原纤维、炎症细胞和肌成纤维细胞虽然较空白对照组增加,但比起瘢痕模型组无论胶原纤维粗细、排列还是细胞成分均更接近对照组的正常组织,其整体情况介于对照组和瘢痕模型组之间,纤维束排列接近对照组,可见少量炎性细胞。免疫组化显示ADSCs组瘢痕组织中TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达明显受抑制,胶原纤维化及炎症浸润情况也较瘢痕组轻微。结论:CAL技术确实可有效地提高移植脂肪的远期成活率,同时减少和避免术后并发症发生。其中ADSCs在促进脂肪存活同时,可有效改善瘢痕质地,抑制胶原纤维增长,减少瘢痕区炎症细胞浸润。CAL技术在对瘢痕性面部凹陷及萎缩的容量填充及瘢痕质地改善较传统脂肪移植手术有明显优势,值得推广。