【摘 要】
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环鸟苷二磷酸(c-di-GMP):是细胞内的第二信使,对细胞的活性、毒力、表面粘附性、细胞周期、细胞分化及细胞的适应性和长期生存有着重要的调控作用,但其与DNA复制的关系未见报
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环鸟苷二磷酸(c-di-GMP):是细胞内的第二信使,对细胞的活性、毒力、表面粘附性、细胞周期、细胞分化及细胞的适应性和长期生存有着重要的调控作用,但其与DNA复制的关系未见报道。Ms2196是耻垢分枝杆菌中唯一合成和降解c-di-GMP的蛋白。本研究首先发现Ms2196与耻垢分枝杆菌DNA复制过程的引物合成酶DnaG (DnaGMsm)存在物理上的相互作用。进一步,发现了DnaGMsm能直接结合c-di-GMP.具体结果包括以下几个方面：(1)通过细菌双杂交实验、体外Pull down实验、免疫共沉淀实验(Co-IP)及表面等离子共振实验(SPR)等方法证明耻垢分枝杆菌的DnaGMsm和Ms2196存在相互作用。(2)通过对DnaGMsm,和Ms2196分别进行缺失突变分析,并结合细菌双杂交实验、Pull down实验和SPR实验,证实了DnaGMsm的C端结构域与Ms2196的N端结构域存在物理相互作用。(3)通过紫外交联实验,证实了DnaGMsm和c-di-GMP能够形成复合物。(4)GTP和c-di-GMP两个小分子可以竞争性地与DnaGMsm结合,同时我们表明DnaGMsm可能含有2个c-di-GMP结合位点。这些研究结果有助于我们更加深入认识耻垢分枝杆菌的DNA复制调控机制以及细菌第二信使分子c-di-GMP的调控功能。
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