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紫花苜蓿（Medicago sativa L.）是豆科多年生草本植物，营养丰富，已成为我国“三元”种植结构调整的首选饲料作物，为扩大种植区域，生产上急需抗寒、抗旱、耐盐的新品种。利用植物基因工程方法提高苜蓿抗逆性是现代育种的重要途径。 本研究以肇东紫花苜蓿和Pleven6紫花苜蓿为实验材料，建立一套适宜的苜蓿离体再生体系，通过农杆菌介导法将由rd29启动子调控的转录因子CBF2对其进行转化，以提高苜蓿的抗逆性。研究结果如下： 1．建立了适宜的肇东紫花苜蓿和Pleven6紫花苜蓿离体再生体系。 以7日苗龄的肇东苜蓿和9日苗龄的Pleven6苜蓿的子叶作为外植体最为适宜，诱导率为92.5％和86.7%，分化率为70.3%和62.5%。最佳愈伤诱导培养基：肇东苜蓿为 MS+2.0mg/L2,4-D+0.5mg/L KT+3%蔗糖，Pleven6为MS+1.5mg/L2,4-D+0.5mg/LKT+3%蔗糖；分化培养基：MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+3%蔗糖；分化继代培养基：MS+0.3mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+0.3mg/LKT+3%蔗糖；生根培养基：1/2MS+0.5mg/LNAA+1.5%蔗糖。 2．建立了发根农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化的体系 以苜蓿的子叶作为外植体，预培养2d后用发根农杆菌R1000侵染，菌液浓度为OD600值0.3～0.4、侵染时间肇东苜蓿为15min、Pleven6苜蓿为10 min，共培养3d后，用150 mg/L的Sm脱菌，采用40mg/L的延迟筛选，筛选过程中Sm浓度从150mg/L逐渐降低至50mg/L，Km浓度由40mg/L降至15mg/L。 3．转基因苜蓿的获得 共培养法转化苜蓿的子叶外植体数共240个，得到了生根的抗性再生植株37株，其中肇东苜蓿21株和Pleven6苜蓿16株。经过PCR检测阳性植株为23株，肇东苜蓿14株和Pleven6苜蓿9株，转化率分别为66.7%和56.3%。 整株转化法转化的肇东苜蓿和Pleven6苜蓿各30株，经过PCR检测阳性植株肇东苜蓿21株和Pleven6苜蓿19株，转化率分别为70%和63.3%。 4．对转基因苜蓿进行生理指标的测定。 转基因苜蓿可溶性糖、可溶性蛋白、游离脯氨酸的含量不同程度的高于对照组，尤其在进行低温、干旱、盐碱胁迫后含量明显高于对照组，说明转基因苜蓿抗逆性得到了提高。