耻垢分枝杆菌BAC文库构建及结核分枝杆菌免疫原蛋白与结核分枝杆菌全蛋白质组互作

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结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)作为结核病的病原菌,因其生长极为缓慢(比大肠杆菌生长速率慢50-70倍),在很大程度上制约了结核病的诊断,预防与治疗。已有研究表明结核分枝杆菌缓慢的生长速度是受多方因素共同协调。鉴于结核分枝杆菌同属的耻垢分枝杆菌(Mycobacteriumsmegmatis)生长速度快于结核分枝杆菌。本研究将建立耻垢分枝杆杆菌BAC文库,在结核分枝杆菌中异源表达多种耻垢分枝杆菌基因,以获得生长明显加快的人工结核分枝杆菌异源表达菌株。进而,通过对这些菌株DNA,RNA和蛋白水平的分析,筛选得到结核分枝杆菌生长影响因子,从而阐明结核分枝杆菌生长缓慢的原因。然而,耻垢分枝杆菌基因组小,导致建立BAC文库存在困难,建库后测序未成功,阻碍了进一步的工作进程。  结核病现在仍是影响人类公共卫生的重大传染疾病,而缺乏标识物,检出率低是结核病防控的难题之一,提高肺结核早期诊断的质量和速度对结核病的控制和治疗有着重大的意义。  另外,我们课题组与多家单位合作制备了首张结核分枝杆菌全基因组芯片,并且新发现12个结核分枝杆菌免疫原蛋白,这些蛋白在结核病的筛查、诊断以及治疗效果检测方面具有巨大的应用潜力。因此,本研究利用结核分枝杆菌蛋白质组芯片,获得了12个免疫原蛋白与结核分枝杆菌全蛋白质组的互作网络图,确定了800多个与这12个免疫原蛋白有相互作用的的结核分枝杆菌蛋白。这些发现对于免疫原蛋白在结核病原体内作用机制的研究有着指导性意义,将为下一步发展新型高效疫苗、新型药物和检测技术提供帮助。
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