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该研究分三阶段进行.第一阶段用人卵巢上皮性癌细胞系HO-8910建立裸鼠人卵巢上皮性癌皮下移植瘤模型,为IL-18的实验研究提供动物模型.第二阶段用不同剂量的IL-18治疗已移植肿瘤成功的卵巢癌裸鼠模型,探讨其治疗的有效性及剂量效应.第三阶段对脾NK细胞的活性进行检测,探讨IL-1 8的作用机制,并观察治疗后移植肿瘤的病理改变.材料和方法:1.实验动物.BALB/C nu/nu裸小鼠(由中山医科大学动物实验部提供),雌性,鼠龄4-6周,体重20g左右,在SPF级实验条件下饲养.2.动物模型.2.1.培养卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株HO-8910(由中国科学院上海细胞所提供),HO-8910细胞系选择4.5×10<6>个/100μ 1的细胞接种浓度,接种于12只裸鼠的后项中间,建立人卵巢浆液性乳头状囊腺癌裸鼠皮下移植瘤模型;接种7天后,处死裸鼠,观察裸鼠的成瘤情况,取其肿瘤标本作病理分析.这部分实验作为预实验的一部分.2.2.按照预实验皮下移植瘤的建模条件,建立24只用于观察MurinerIL-18治疗卵巢癌效果的实验用裸鼠动物模型.3.药物.鼠源性重组白细胞介素-18(Murine rIL-18)由美国R&D公司提供.4.实验分组和治疗将24只建模成功的荷人卵巢浆液性乳头状囊腺癌皮下移植瘤裸鼠随机分成4组,每组6只.Murine rIL-18的治疗剂量和时间分别为:A组:0 μg/100μ 1×7天、B组:0.25 μg/100μ 1×7天、C组:0.5 μ g/100μ×7天、D组:1.0 μ g/100μ 1×7天,治疗后观察2周.5.检测指标和检测方法.5.1瘤重(Tumor weight)、抑瘤率(Inhibition rate).治疗后2周,用颈椎脱位法处死动物,剥离原位肿瘤后通过直接称重,得出瘤重(W),并计算抑瘤率.抑瘤率=(对照组平均瘤重-实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重×1 00％.5.2肿瘤生长平均相对体积(Tumor Mean Relative Volume).从注射药物开始每3天用游标卡尺测量肿瘤的最小直径(SD)和最大直径(LD),假定肿瘤是不规则形状,我们通过以下公式[(SD)2(LD)/2]/[(SD)2(LD)/2](day 0)(8)计算肿瘤生长平均相对体积,绘制出肿瘤生长曲线.5.3 MTT还原法检测NK细胞的活性.处死裸鼠后无菌取脾,取新鲜脾组织制成脾细胞悬液,用MTT还原法检测NK细胞的活性.按下述方法计算NK细胞的活性<(9)>,以杀伤率％表示:NK细胞活性(％)=[1-实验孔(效+靶)OD值-效应细胞对照孔OD值]/靶细胞对照孔OD值×1 00％5.4荷瘤裸鼠病理改变的观察.用颈椎脱位法处死裸鼠后取肿瘤标本,标本用10％甲醛固定、石蜡包埋,HE染色,作组织病理学检查,通过以下公式计算镜下肿瘤细胞平均坏死率.肿瘤细胞平均坏死率=(坏死肿瘤细胞数/肿瘤细胞数)×100％.6.统计学处理.瘤重、抑瘤率、肿瘤生长平均相对体积、NK细胞的活性、镜下肿瘤细胞平均坏死率以x±s表示,所有数据均利用SPSS10.0 for Windows统计软件包进行相关分析和统计,其中采用的方法包括t检验、组间比较采用方差分析处理.结论:1.使用HO-8910细胞系建立的裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,可用于IL-18治疗卵巢癌的效果和作用机制的研究,是较理想的研究卵巢癌免疫治疗机制和临床前研究的动物模型.2.IL-18能有效地抑制卵巢癌的生长速度,肿瘤体积增长的抑制作用与IL-18的治疗剂量呈正相关;IL-18在0.25 μg/100μ 1时也能有效地抑制卵巢癌的生长,但其最适宜的治疗浓度有待进一步探讨.3.IL-18能显著提高荷卵巢癌裸鼠NK细胞的活性,提示IL-18可通过激活机体的NK细胞活性起抑制卵巢上皮性癌肿瘤细胞生长的作用;NK细胞的活性随着IL-1 8治疗浓度的增加有提高的趋势.4.IL-18治疗后肿瘤病理切片显示治疗组肿瘤的平均坏死率明显大于对照组,但其机制是否通过诱导细胞凋亡而起作用,尚需进一步探讨.